小鼠AK142849和AK003491基因的印记鉴定和表达分析

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yuhuiru871124
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基因印记是指两个等位基因中只表达其中一个的表观遗传现象,父本表达则称为母本印记,反之亦然。小鼠12号染色体末端Dlk1-Dio3印记区域包含3个父本表达的蛋白编码基因:Dlk1、Rtl1、Dio3,和多个母本表达的非编码RNA基因:Meg3/Gtl2、Anti-Rtl1、Meg8、Irm、Meg9/Mirg,以及大量的microRNA和snoRNA(核仁内小RNA)。在这一印记区域内的基因间区域存在着许多印记状况和表达模式未知的Riken cDNA克隆和大量的EST,说明这一区域可能存在着新的印记基因。通过生物信息学搜索和筛选,我们发现和锁定位于Anti-Rtl1和Meg8之间的两个mRNA:AK142849和AK003491;通过利用SNP区分父本和母本染色体和对RT-PCR产物直接测序,我们鉴定 AK142849和AK003491是两个新的母本表达的印记转录本;通过全胚胎原位杂交技术分析 AK142849和AK003491的表达显示,在E9.5天它们主要表达在前脑;组织切片原位杂交结果显示,在 E15.5天AK142849和AK003491主要表达在前脑、后脑、舌、体节、延髓、肺、肝等。最后,我们用定量 PCR技术全面分析了 AK142849和AK003491在E12.5、E15.5和E18.5天的脑、舌、心、肺、肝、肾六个组织中的表达水平,结果显示从 E12.5到E18.5,在脑和舌中AK142849和AK003491的表达呈上升趋势,在心、肺、肝、肾四个组织中则呈下降趋势。总之,本研究鉴定了两个新的印记转录本并分析了它们的表达,这有助于认清这一区域内印记基因的组织和编排形式及表达模式,为进一步分析和研究它们及Meg3/Gtl2下游的其它非编码RNA的功能和调控奠定基础。
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