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研究背景阿尔茨海默病（Alzheimer Disease,AD）是一种中枢神经系统原发性、退行性疾病,是老年期痴呆最常见的类型。其病理学特征是:出现在与学习、记忆相关的大脑皮层的老年斑（senile plaques ,SP）、神经纤维缠结、神经元的缺失。β淀粉样多肽﹙βamyloid pepitide, Aβ﹚形成的丝状沉淀是SP的重要组成成分。虽然大量的研究表明Aβ有细胞毒性作用,可以引起细胞的坏死和凋亡,但其细胞损伤机制至今尚不清楚。阴离子的自稳态在凋亡过程的作用受到了日益广泛的重视。氯离子作为细胞内的优势阴离子,在细胞容积调节及细胞凋亡中发挥着重要作用。研究表明,氯通道激活,细胞内氯离子外流,引起凋亡性细胞容积减小（apoptotic volume decrease ,AVD）,最后导致凋亡事件的发生,氯通道阻滞剂可以抑制AVD以及随后的凋亡事件。研究目的1.研究细胞色素C释放和caspase3激活在Aβ25-35毒性中的作用。2.探讨氯通道阻断剂DIDS对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响。研究方法本实验采用大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）作为研究对象,实验分组:无任何干预的对照组、40μmol/L Aβ25-35损伤组、40μmol/L Aβ25-35+ 50μmol/L DIDS保护组。通过四甲基偶氮唑兰代谢率测定检测细胞存活率;利用光镜Hoechst 33258荧光染色技术来观察细胞凋亡现象;采用流式细胞仪技术检测早期凋亡率;应用western blot免疫印迹技术研究细胞色素C和caspase3的表达。研究结果1.诱导Aβ25-35对PC12细胞凋亡作用的产生:①随着Aβ25-35作用时间的延长,细胞存活率逐渐下降。②Hoechst 33258荧光染色结果显示Aβ25-35组细胞核致密浓染,或呈碎块状致密浓染的DNA碎片,核膜皱缩,呈现典型的凋亡形态学改变。③流式细胞技术检测Aβ25-35组早期细胞凋亡率为35.7%±6.1%,对照组1.5%±0.5%,P < 0.05。2.证实了DIDS对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的保护作用:①MTT结果示细胞存活率增高与DIDS的剂量有关,呈现剂量依赖性递增。②荧光染色方法从形态学结果显示氯通道阻断剂DIDS能明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞的凋亡。流式细胞仪检测显示DIDS能明显抑制Aβ25-35诱导细胞早期凋亡,DIDS组细胞凋亡率为5.6%±1.0%,显著低于Aβ组,P < 0.05。③Aβ干预PC12细胞6h开始细胞色素C表达增高,12h开始caspase3表达增强,DIDS干预后细胞色素C和caspase3的表达均受到明显抑制。研究结论1.Aβ25-35所致PC12细胞凋亡依赖线粒体-细胞色素C释放途径,继而上调凋亡执行蛋白分子caspase3,触发细胞凋亡。2.氯通道阻断剂DIDS明显下调Aβ25-35的细胞毒作用,保护细胞免于凋亡。