【摘 要】
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自1998年RNA干扰现象被发现以来,调控性小非编码RNA的成员日益扩大,越来越多的研究证明这些小非编码RNA对生长发育和基因表达调控具有举足轻重的地位。其中PIWI-interacting RNA（pi RNA）不仅可以介导转座子的沉默,促进表观遗传修饰,参与转录水平和转录后水平的基因调控,还能识别并沉默外来序列,抵抗病毒入侵,从而维持基因组的完整性和稳定性。从低等动物到高等动物人类,pi RN
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自1998年RNA干扰现象被发现以来,调控性小非编码RNA的成员日益扩大,越来越多的研究证明这些小非编码RNA对生长发育和基因表达调控具有举足轻重的地位。其中PIWI-interacting RNA（pi RNA）不仅可以介导转座子的沉默,促进表观遗传修饰,参与转录水平和转录后水平的基因调控,还能识别并沉默外来序列,抵抗病毒入侵,从而维持基因组的完整性和稳定性。从低等动物到高等动物人类,pi RNA的缺乏通常导致生殖细胞功能异常,并且与pi RNA产生特异相互作用的PIWI家族蛋白的缺失也会导致生殖系统发育异常。虽然目前有关pi RNA的基因沉默功能已经逐渐清晰,但这种沉默功能需要哪些其他因子的参与仍然了解甚少。在本课题组前期的工作中通过反向遗传筛选找到了一个能够影响pi RNA基因沉默功能的因子RNA解旋酶家族蛋白CGH-1。本文以此为研究对象,利用化学交联技术和免疫沉淀偶联蛋白组学技术鉴定了与CGH-1存在物理相互作用的pi RNA通路相关因子,并通过免疫共沉淀验证了这种互作的存在。通过蛋白印迹法和实时荧光定量PCR证明了CGH-1突变影响了部分pi RNA通路相关因子的表达水平。利用体外蛋白纯化技术和凝胶阻滞迁移实验技术等生化手段鉴定出了CGH-1上几个潜在的RNA结合位点,这些结果为进一步的体内验证实验和深刻解析CGH-1参与pi RNA通路调控的具体机制奠定了坚实的基础。
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