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目的:制备鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA（1-128）三价融合蛋白,将其作为候选疫苗接种Balb/c小鼠,评估其免疫原性和免疫保护作用。方法:1.以含SmpA、Omp22及lpA融合基因的质粒pcDNA3.1-SON（该质粒由上海生工生物工程公司构建）为模板,设计适当引物扩增出含有SmpA、Omp22基因完整编码序列及nlpA基因5’端384个碱基对的融合基因片段。2.将该融合基因片段克隆至质粒载体pcold Ⅰ中,构建重组质粒 pcold Ⅰ-SmpA/Onp22/NlpA（1-128）;再将该重组质粒转化进E.coli BL21进行原核表达,并纯化出重组蛋白。3.将36只6-8周龄的雌性Balb/c小鼠随机分为三组:重组蛋白免疫组、PBS对照组、佐剂对照组。重组蛋白免疫组每只小鼠背部皮下注射入约20μg重组融合蛋白（溶于100μLPBS）与等体积的弗氏佐剂的混合溶液;PBS对照组每只小鼠背部皮下注射10OμLPBS缓冲液。佐剂组每只小鼠背部皮下注射100μL弗氏完全佐剂,首次免疫接种后第14天、28天分别加强免疫一次。4.末次免疫接种后第7天、21天各组随机取6只小鼠内眦取血分离血清,ELISA试剂盒检测抗体效价,每组6只小鼠末次取血后处死,无菌条件下分离小鼠脾淋巴细胞,抗原刺激培养后CCK-8试剂盒测定脾淋巴细胞增殖活性,收集细胞培养液,试剂盒检测脾淋巴细胞γ-干扰素、IL-4分泌情况。5.每组剩余6只小鼠在末次免疫三周后经腹腔注射鲍曼不动杆菌ATCC 19606株进行攻击试验,24h后尾静脉取血测定细菌载量、内眦取血后分离血清检测炎症细胞因子含量;攻击48h后分离小鼠肺组织作病理形态学分析。结果:成功构建了重组质粒pcold Ⅰ-SmpA/Omp22/NlpA（1-128）,该重组质粒转化大肠杆菌后主要以包涵体形式表达目的蛋白,经SDS-PAGE和Western-blot鉴定,重组蛋白分子量与理论值相符,并能被抗6×His抗体特异性识别。经重组蛋白免疫的小鼠诱导了高水平的抗原特异性IgG抗体。免疫组小鼠脾淋巴细胞增殖活性及IL-4分泌量明显高于PBS对照组和佐剂对照组（P<0.001）,而三组小鼠的IFN-γ分泌量无明显差别;鲍曼不动杆菌攻击试验24h后检测到的重组蛋白免疫组小鼠细菌载量明显低于PBS和佐剂对照组（P<0.001）。重组蛋白免疫组小鼠攻击24h后血清IL-6、IL-10水平均低于PBS对照及佐剂对照组（P<0.01）。肺组织HE染色结果显示,PBS对照组及佐剂对照组小鼠肺组织存在明显的病理改变,而重组蛋白组小鼠肺组织仅有轻微的病理改变。结论:三价重组融合蛋白SmpA/Omp22/NlpA（1-128）免疫小鼠后诱导了较强的免疫应答和免疫保护效应,本研究结果可为进一步设计和研制鲍曼不动杆菌预防和治疗性疫苗提供参考依据。