论文部分内容阅读
背景与目的：肺癌已成为我国发病率、死亡率最高的肿瘤疾病之一。非小细胞肺癌(Non small cell lung cancer, NSCLC)约占所有诊断肺癌的80%,而大部分患者确诊时已为疾病的晚期,失去了手术、放疗、化疗的最佳时机。随着近年来分子生物学的不断发展,针对NSCLC的分子靶向药物治疗已经成为晚期NSCLC患者新的治疗途径。然而NSCLC的发展是由遗传、环境、机体免疫等多因素相互作用,相关基因结构和表达异常、肿瘤血管生成等多种生物学活动共同参与的复杂过程。目前应用于临床的分子靶向药物的有效率仍然较低,研析NSCLC的发病机制,对于其早期诊断和有效治疗具有重要的意义。肾上腺髓质素(Adrenomedullin, ADM)、中介素(Intermedin, IMD)、人类尾加压素(human Urotensin-Ⅱ, hU Ⅱ)、尾加压素相关肽(Urotensin Related-peptide, URP)等属于小分子活性肽类物质,可以在体内多种组织和器官中表达,具有多种生物学功能。ADM、IMD同属于降钙素基因相关肽家族,均具有强大的扩血管作用。ADM可以在心衰时发挥降血压、抗氧化等保护缺氧心肌细胞的作用。IMD可以调节肾血流量和肾小球滤过率,并可以在肾脏缺血再灌注时表达增高,减轻肾组织的损伤。hUⅡ、URP同属于生长抑素家族。hUⅡ被认为是迄今为止最强的收缩血管的物质,可参与心肌肥厚、高血压等疾病的病理生理过程。URP可以调节中枢神经系统的活动。研究发现,ADM、hUⅡ及其受体在多种肿瘤细胞株和实体瘤中异常表达,并具有刺激肿瘤血管的生长,促进细胞有丝分裂等作用。IMD、URP与肿瘤的相关研究较少,但有研究已发现IMD在肾上腺皮质癌、黑色素瘤等实体瘤中高表达；URP在肺淋巴管瘤中表达高于正常肺组织。本课题组前期已应用放射免疫法、免疫组织化学法发现肺癌患者血浆及组织中ADM、IMD、hUⅡ的表达高于健康对照组。为进一步探讨ADM、IMD、hUⅡ、URP在NSCLC发生发展中的作用。本研究应用实时荧光定量PCR的方法检测ADM、IMD及其受体降钙素受体样受体(Calcitonin receptor like receptor, CRLR)、受体活性修饰蛋白1-3(Receptor activity modifying protein1-3, RAMP1-3), hUⅡ、URP及其受体尾加压素Ⅱ受体(Urotensin-Ⅱ receptor, UT)在NSCLC患者癌组织和癌旁组织中的表达情况,阐明ADM、IMD、hUⅡ、URP的表达与NSCLC病理类型、TNM (Tumor Node metastasis, TNM)分期、远处转移等临床特征的关系；揭示ADM、IMD、hUⅡ、URP不同受体在癌组织和癌旁组织中的表达情况,探讨ADM、IMD、 hUⅡ、URP在NSCLC发生、发展等病理生理过程中的作用。方法：收集非小细胞肺癌患者手术切除的新鲜癌组织和癌旁组织标本和临床资料；设计合成引物,采用实时荧光定量PCR的方法检测ADM、IMD、hUⅡ、URP及相关受体CRLR、RAMP1、RAMP2、RAMP3和UT mRNA在组织标本中的表达水平。结果：1.ADM及其受体在NSCLC患者癌组织中的表达高于癌旁组织,且ADM在有转移患者癌组织中的表达高于无转移的患者,差异有统计学意义(P<0.05)2.IMD及其受体在NSCLC患者癌组织中的表达高于癌旁组织,Ⅲ期患者癌组织中IMD的表达高于Ⅰ-Ⅱ期患者,且有远处转移的患者癌组织中的表达明显高于无远处转移的患者,差异有统计学意义(P<0.05)。3.hUⅡ及其受体在NSCLC患者癌组织中的表达高于癌旁组织,Ⅲ期患者癌组织中hUⅡ的表达高于Ⅰ-Ⅱ期患者,远处转移的患者癌组织中的表达明显高于无远处转移的患者,hUⅡ在腺癌患者癌组织中的表达高于鳞癌患者,差异有统计学意义(P<0.05)。4.URP在NSCLC患者癌组织中的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)；URP的表达与NSCLC患者的病理类型,临床TNM分期、远处转移无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。5.在癌组织和癌旁组织中hUⅡ的表达与UT的表达均呈明显的正相关(r=0.979,P<0.001；r=0.786,P<0.001)；在癌组织和癌旁组织中URP的表达与UT的表达无明显相关性(P>0.05)6.在癌组织中RAMP1、RAMP2、RAMP3的表达水平依次为：RAMP3>RAMP2> RAMP1;在癌旁组织中RAMP1、RAMP2、RAMP3的表达水平依次为：RAMP2>RAMP3>RAMP1,差异有统计学意义(P<0.05)。结论：1. ADM、IMD、hUII在NSCLC患者癌组织中的表达不同程度的高于癌旁组织,并且ADM、IMD、hUII在癌组织中的表达与NSCLC患者的TNM分期、淋巴结转移相关,提示ADM、IMD、hUII可能参与NSCLC的发生、发展、侵袭及转移过程。2.hUⅡ在腺癌患者癌组织中的表达高于鳞癌患者,提示hUⅡ在肺腺癌组织中的表达存在一定的特异性,有可能成为肺腺癌临床诊断的指标之一。3.本研究为国内外首次发现URP在NSCLC患者癌组织中的表达高于癌旁组织,推测URP可能会参与NSCLC的发生发展。4.在癌组织和癌旁组织中,hUⅡ的表达与UT的表达呈明显的正相关,提示与URP相比,hUⅡ可能会在NSCLC的发生发展的过程中发挥更重要作用。5.在癌组织中RAMP3的表达最高,在癌旁组织中RAMP2的表达最高,提示RAMP3可能在NSCLC的发生发展的病理生理过程中发挥重要作用。