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背景本课题组前期已采用基因芯片技术完成艾滋病期脾肾阳虚证、热毒蕴结证患者和健康志愿者microRNA表达谱的检测。脾肾阳虚证组与健康对照组比较,筛选出表达有显著性差异(P<0.05)的microRNA共89条,其中52条上调(58%),37条下调(42%),GO富集分析发现其证候生物学基础可能与自然杀伤细胞介导的细胞毒作用,T细胞活化中的IL-15、IL-6受体的作用,细胞凋亡,转化生长因子β(TGF-p)等相关；热毒蕴结证组与健康对照组比较,筛选出表达有显著性差异(P<0.05)的microRNA共100条,其中64条上调(64%),36条下调(36%),GO富集分析发现其证候生物学基础可能与T细胞活化中的IL-21受体的作用,C反应蛋白,血小板,氧化应激等相关。目的探讨艾滋病期脾肾阳虚证和热毒蕴结证与差异microRNA表达的相关性,以期发现艾滋病上述两证型的microRNA特异性表达特征,探索其形成的生物学基础,为艾滋病中医证候诊断的客观化提供实验依据。方法本研究选取前期芯片筛选结果中艾滋病期脾肾阳虚证组、热毒蕴结证组分别和正常对照组相比较表达具有显著差异的microRNA各9条,其中5条microRNA在两证型中共有(脾肾阳虚证目的基因：hsa-let-7b-5p、hsa-miR-15b-5p、 hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-144-3p、 hsa-miR-144-5p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c;热毒蕴结证目的基因:hsa-let-7b-5p、 hsa-let-7f-1-3p、hsa-let-7g-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-126-3p、hsa-miR-144-3p、 hsa-miR-320a、hsa-miR-320c、hsa-miR-3940-5p、两证型共有的目的基因：hsa-let-7b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c)。运用实时荧光定量PCR技术(Quantitative Real-time PCR, qRT-PCR)对采集的艾滋病期脾肾阳虚证、热毒蕴结证患者和健康志愿者的标本进行上述目的microRNA表达量的检测,以U6为内参物进行标准化,采用2-ΔCT值来表示目的基因的相对表达量。运用SPSS V20.0统计软件分析目的microRNA在艾滋病期脾肾阳虚证组、热毒蕴结证组和正常对照组的差异表达。结果1、脾肾阳虚证组与正常对照组比较：hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-15b-5p、 hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-144-5p在艾滋病期脾肾阳虚证组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与芯片筛选结果相一致。hsa-let-7b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a在艾滋病期脾肾阳虚证组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)；hsa-miR-320c在艾滋病期脾肾阳虚证组表达下调,但差异无统计学意义(P>0.05)。这4条microRNA的表达下调与基因芯片筛选结果表达上调不相吻合。2、热毒蕴结证组与正常对照组比较：hsa-let-7g-5p、hsa-miR-126-3p在艾滋病期热毒蕴结证组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),与芯片筛选结果相一致。hsa-miR-15b-5p在艾滋病期热毒蕴结组表达下调,其下调趋势与芯片筛选结果相一致,但差异无统计学意义(P>0.05)。hsa-let-7b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c、hsa-miR-3940-5p在艾滋病期热毒蕴结证组表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)；hsa-let-7f-1-3p在艾滋病期热毒蕴结组表达下调,但差异无统计学意义(P>0.05)。这6条microRNA的表达下调与芯片筛选结果表达上调不相吻合。3、hsa-let-7b-5p、hsa-miR-15b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a、hsa-miR-320c的表达在艾滋病期脾肾阳虚证组和热毒蕴结证组之间无明显变化,差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论1、hsa-miR-19b-3p、hsa-miR-30e-5p、hsa-miR-106b-5p、hsa-miR-144-5p的qRT-PCR验证结果与芯片筛选结果相一致,表明这4条microRNA与艾滋病期脾肾阳虚证具有一定的相关性。本研究结果提示以上4条microRNA可以作为艾滋病期脾肾阳虚证的生物标志物,其涉及的IL-6、自然杀伤细胞活化、TGF-β、肿瘤坏死因子(TNF-α)等免疫调节和炎症反应的调控可能是艾滋病期脾肾阳虚证形成的生物学基础。2、hsa-let-7g-5p、hsa-miR-126-3p的qRT-PCR验证结果与芯片筛选结果相一致,表明这2条microRNA与艾滋病期热毒蕴结证具有一定的相关性。本研究结果提示以上2条microRNA可以作为艾滋病期热毒蕴结证的生物标志物,其涉及的细胞凋亡、内皮细胞相关功能和免疫应答等生物学过程的调控可能是艾滋病期热毒蕴结证形成的生物学基础。3、hsa-let-7b-5p、hsa-miR-144-3p、hsa-miR-320a在艾滋病期脾肾阳虚证、热毒蕴结证组的表达均较正常对照组出现差异,且在两证型间表达无差异,本研究结果提示其可能在艾滋病的病理生理过程中发挥重要的调控作用,可以作为潜在的艾滋病生物标志物进一步深入研究。