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体外受精和体细胞克隆技术是提供牛胚胎移植胚胎来源的重要技术方法。本试验（论文）研究了影响牛体外性控胚胎影响因素（试验一）和体细胞克隆的影响因素（试验二）,研究了不同冷冻方法对牛体外受精和体细胞克隆胚胎ATP含量和ROS水平的影响（试验三）,利用实时定量PCR研究了马-牛异种体细胞克隆胚胎线粒体DNA情况（试验四）,得到以下试验结果:试验一:本实验研究了卵母细胞体外成熟后卵丘细胞脱除程度、种公牛个体以及性控精液受精滴体积、性控精子密度等对牛体外性控胚胎生产的影响。试验结果表明:1、卵丘细胞部分脱除组的卵裂率（67±4.74%）显著性高于不脱除组（41±2.23%）、完全脱除组（37.50±2.88%）（P<0.05）;2、种公牛B的性控精液进行体外受精,囊胚率（26.53±3.31%）要显著高于A公牛（17.65±3.65%）和C公牛（16.67±2.36%）（P<0.05）;3、50μL～100μL受精滴囊胚率（20.41±4.33%～23.38±4.47%）无显著性差异（P>0.05）,但显著性高于40μL、30μL的囊胚率（13.79±2.02%、12.12±3.73%）（P<0.05）;4、精子密度0.5×106个/ mL～1×106个/mL的囊胚率（22.58±2.17%～27.27±3.49%）相比无显著性差异（P>0.05）,但显著性高于0.3×106个/mL-1组的囊胚率（16.13±3.46%）（P<0.05）。试验二:本试验研究了奶牛克隆重构胚不同化学激活方法、克隆重构胚体外培养条件和公牛和母牛供体细胞等对奶牛手工克隆和显微注射克隆效率的影响。试验结果表明:（1）建立了优秀种公牛体细胞系20个,高产奶牛体细胞系4个;（2）A23187+6-DMAP和A23187+放线菌酮组合处理激活体细胞克隆重构胚卵裂率（82.62% VS 78.15%）和囊胚率（34.15% VS 30.21%）差异不显著,但是A23187+6-DMAP囊胚质量较好;（3）克隆重构胚在mCR1aa培养液卵裂率（83.65%）和囊胚率（34.36%）,均显著高于SOF和CR1aa两种培养液;（4）血清饥饿处理供体细胞的克隆重构胚融合率（90.52%±2.62）、卵裂率81.27%±3.68和囊胚率（31.46%±2.42）和接触抑制的克隆重构胚（89.25%±1.92）、（82.44%±4.42）、（30.44%±2.77）差异不显著;（5）种牛克隆胚胎移植妊娠率37.0%（10/27）,其中青年荷斯坦母牛移植妊娠率（46.2%）显著高于经产西门塔尔杂交受体母牛（28.6%）。西门答尔杂交受体母牛移植克隆胚胎后分别在妊娠的70～90d内流产,1头荷斯坦母牛妊娠受体101天后屠宰,1头荷斯坦母牛妊娠155天流产2个胎儿,1头荷斯坦妊娠149天流产2个胎儿。试验三:本实验采用常规法或玻璃化法（OPS法）冷冻保存牛IVF囊胚和SCNT囊胚,利用ATP Bioluminescence Assay Kit HS II和GENMED ROS Assay Kit检测冷冻-解冻后囊胚ATP含量和ROS水平。试验结果表明:1、IVF和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后存活率（92.24±4.54%,78.71±5.91%）均显著高于常规冷冻法（81.56±2.33%、47.89±5.83%）（P<0.05）;2、IVF囊胚和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后ATP含量（0.62±0.04 pmol, 0.30±0.01 pmol）均显著高于常规冷冻法（0.43±0.06 pmol, 0.21±0.02 pmol）（P<0.05）;但是均显著低于相应的IVF或SCNT对照组新鲜囊胚（0.74±0.05 pmol,0.39±0.01 pmol）;3、玻璃化冷冻IVF囊胚（72.14±4.31 cps）、SCNT囊胚（40.11±5.73 cps）ROS水平高于新鲜IVF囊胚（47.33±3.56 cps）、SCNT囊胚（26.44±1.49 cps）（P<0.05）,常规冷冻组则与此相反（34.41±3.32 cps vs.47.33±3.56 cps;15.46±2.45 cps vs.26.44±1.49 cps）（P<0.05）。试验四:本试验研究了手工克隆和显微注射方法对马-牛异种克隆效率的影响,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测马-牛异种克隆胚胎不同发育阶段线粒体编码基因细胞色素B的转录水平。试验结果表明:（1）手工方法克隆马-牛异种重构胚融合率（95.12%）、卵裂率（97.07%）显著高于显微注射法的融合率（70.25%）和卵裂率（85.21%）,但两者之间的囊胚率差异不显著（2.64%±1.68 vs2.36%±1.59）;（2）供体马CYBT基因的表达水平在1-细胞期的重构胚中表达量最高,而在囊胚期,却没有检测到该基因的转录本。牛CYBT基因,在1-细胞期到8-细胞期,其表达量逐渐下降,而在16-细胞期的异种克隆胚中,该基因的表达量急剧升高到最高值,比1-细胞期增加了11倍,随后囊胚期表达水平锐减到为起始水平的2倍。