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肝纤维化是慢性肝脏疾病进展的标志,因而控制肝纤维化进展成为降低终末期肝病的发生率的有效途径。近年来,信号通路在慢性肝病中的作用成为研究热点,寻找有意义的信号通路可以预防和降低终末期肝病发生率,从而靶向治疗终末期肝病。本课题分为两个部分,首先从临床方面发现MAPK/ERK1/2信号通路在慢性乙型病毒性肝炎病程进展中的作用;进一步在DMN肝纤维化小鼠模型中,深入研究SDF-1/CXCR4轴及其介导的MAPK/ERK1/2信号通路的重要作用。第一部分临床研究MAPK/ERK1/2信号通路在乙肝肝纤维化进程中的作用目的:探讨MAPK/ERK1/2信号通路在慢性乙型病毒性肝炎(Chronic Hepatitis B,CHB)肝纤维化进展中的作用。观察CHB患者ERK1/2及其下游因子NF-k B p65在慢性乙肝进展不同肝硬度值(Liver stiffness values,LSM值)及HBV DNA、HBe Ag水平之间的表达水平变化。对判断慢性肝炎程度,进行干预治疗,控制其向终末期肝病进展有重要意义。方法:选取2015年6月至2015年12月就诊于大连医科大学附属第一医院感染科门诊及住院的99例CHB患者,收集患者病史资料、患者血清,检测患者血清肝功能、HBV DNA、HBe Ag、ERK1/2、NF-k B p65,测定患者LSM值。根据HBV DNA值将所有CHB患者分为两组:HBV DNA<500IU/ML组和HBV DNA≥500IU/ML组;根据HBe Ag的表达情况将所有CHB患者分为两组:HBe Ag(+)组和HBe Ag(-)组;根据LSM值不同将患者分为四期:F0-F1期(<7.4KPA);F2期(7.4-9.4KPA);F3期(9.4-17.5KPA);F4期(>17.5KPA),比较各组之间血清肝功能、ERK1/2和NF-k B p65表达水平变化。结果:1.随着肝纤维化程度加重,血清肝功能中ALT、AST、Glob、ALP、GGT、TBil、DBil表达逐渐上升,Alb、CHE表达逐渐下降,表现为肝功能的持续性损伤状态。2.HBV DNA≥500IU/ML时,ERK1/2及NF-k B p65表达水平均增加,且ERK1/2表达水平增加有显著性差异(P<0.05)。3.HBe Ag(+)时,ERK1/2及NF-k B p65表达水平均增加,且ERK1/2表达水平增加有显著性差异(P<0.05)。4.LSM分期与ERK1/2及NF-k B p65表达水平呈正比。与F0-F1期相比,ERK1/2及NF-k B p65表达水平均有显著性增高(P<0.05);F3期与F2期相比,ERK1/2及NF-k B p65表达水平均有显著性增高(P<0.05);F4期与F3期相比,ERK1/2表达水平均有显著性增高(P<0.05)。结论:1.随着CHB患者肝纤维化程度加重,其肝功能也呈持续性损伤状态;2.ERK1/2和NF-k B p65的表达水平与HBV DNA数量有关,HBV DNA≥500IU/ML时,ERK1/2及NF-k B p65的表达水平均较高;3.ERK1/2和NF-k B p65的表达水平与HBe Ag表达有关,HBe Ag(+)的CHB患者ERK1/2及NF-k B p65的表达水平均较高;4.ERK1/2和NF-k B p65的表达水平随LSM分期增加而增加,二者表达水平与肝纤维化程度成正比,可用于指导肝纤维化分期。第二部分基础研究MAPK/ERK1/2信号通路在二甲基亚硝胺肝纤维化小鼠中的作用目的:探讨MAPK/ERK1/2信号通路在二甲基亚硝胺(Dimethylnitrosamine,DMN)所致肝纤维化小鼠中的作用机制方法:建立二甲基亚硝胺肝纤维化小鼠模型,分别描述各组小鼠一般状况、肝功能、病理学改变、免疫荧光共定位水平变化以及用免疫组化染色、蛋白印迹(Western Blot)、实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)方法检测α-SMA、ERK1/2及NF-k B p65的表达水平。结果:1.二甲基亚硝胺注射后,各组小鼠一般状况、病理学情况明显变差,肝功能ALT、AST、TBil、DBil、ALP于模型组1-4W均有显著性增高(P<0.05),GGT在模型组1-3W有显著性增高(P<0.05),Alb在模型组1-4W有显著性降低(P<0.05);CHE在模型组2-4W有显著性降低(P<0.05)。模型组各组之间的比较肝功能呈现持续性损害。2.免疫荧光共定位检测在模型组1、2W仅见少量的CD90与Alb或CK18共定位阳性细胞表达,模型组3、4W可见CD90与Alb或CK18共定位阳性细胞逐渐增多。3.免疫组化、Western Blot及RT-PCR检测α-SMA、ERK1/2及NF-k B p65的表达水平均明显上调。结论:1.二甲基亚硝胺(DMN)导致小鼠肝纤维化过程中可以诱导部分骨髓间充质干细胞(BMSCs)向肝细胞样细胞分化;2.二甲基亚硝胺(DMN)导致小鼠肝纤维化是通过上调MAPK/ERK1/2信号通路及其下游的NF-k B p65信号实现。