研究表明,生物体内组蛋白通过甲基化、乙酰化、磷酸化等修饰作用可调整染色质的结构,从而调控基因的表达。我们前期的研究表明,在冷驯化过程中,金柑组蛋白H2B会发生修饰作用,这种修饰介导了金柑的抗冻反应,但其修饰机理尚不清楚。本论文采用冷驯化金柑叶片为材料,从应用免疫共沉淀技术和LC-MS/MS分析获取的组蛋白H2B互作的特异蛋白(或复合物)中,分析鉴定并克隆组蛋白H2B互作蛋白的相关基因。应用转基因技术获得转基因株系,为进一步了解其基因的功能,解析组蛋白H2B修饰作用的分子机理奠定基础,为培育抗冻农作物品种的分子育种提供新基因,为对探讨抗冻转录调控机制具有重要意义。研究结果如下：(1)从应用免疫共沉淀技术和LC-MS/MS分析鉴定得到7个组蛋白H2B互作的蛋白质,分别为碳酸酐酶、钙依赖型蛋白激酶以及5种功能未知的蛋白质：miraculin-like protein 2[Citrus jambhiri](命名为MLP2-1);miraculin-like protein [Citrus x paradisi](命名为MLP-1);miraculin-like protein 2[Citrus jambhiri](命 名为MLP2-2); putative miraculin-like protein 2[Citrus hybrid cultivar](命名为 PMLP2-1; predicted protein[Populus trichocarpa](命名为PP-1),应用生物信息学软件分析并预测这5种蛋白质基因的结构和功能特征,这5种蛋白质都具有信号肽,二级结构均是由α螺旋、β折叠和无规则卷曲组成,MLP2-1、MLP2-2和MLP-1蛋白质只含有反应位点环(reactive site loop),PP-1蛋白质则含有多个结合位点。(2)应用荧光定量PCR技术测定5个未知蛋白的基因在冷驯化进程中的表达量,在4℃处理的4个时间阶段,其表达量均随着时间的增加有不同程度的增大；分别表现为MLP2-1基因在0～6h内表达量有所提高,6h到12h则表达量微微下降,在16～24 h,其表达量逐渐稳步升高；MLP2-2基因在0～6h内其表达量大大提升,诱导倍数约为5.00,而到12h,其表达量反而降低一半,到18 h,其表达量明显增大到近8.00倍,而后其表达量却又下降了；MLP-1基因在0～6h内表达量有所提高,到12h其表达量稍许下降,在16h～24h,其表达量稳步上升,与MLP2-1基因的表达相似；PMLP2-1基因在低温处理的5个阶段,其表达量都趋于稳定上升状态。(3)将MLP2-1基因进行克隆,得到712bp的片段,再与p1300M构建植物表达载体,并成功转入拟南芥中,获得4株转基因苗为进一步研究打下基础。