奥曲肽对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡影响的研究

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目的:研究奥曲肽(octreotide,OCT)对人胃癌BGC-823细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响,探讨OCT对凋亡相关基因survivin和PTEN(Phosphatase andtensin homolog deleted on chromosome ten)在人胃癌BGC-823细胞中表达的影响,初步探讨其诱导胃癌细胞凋亡的可能机理。方法:(1)生长曲线测定OCT对人胃癌BGC-823细胞生长的影响;(2)MTT比色法及集落形成实验研究OCT对人胃癌BGC-823细胞增殖的影响;(3)流式细胞仪技术及AO-EB染色研究OCT对人胃癌BGC-823细胞凋亡的影响;(4)流式细胞仪进行细胞周期分析;(5)RT-PCR和Western-blot法检测凋亡相关基因survivin和PTEN mRNA和蛋白表达的变化,并用计算机图像分析系统进行半定量分析。结果:(1)OCT能够抑制人胃癌BGC-823细胞的生长增殖,10-5-10-2g/L的OCT作用24小时后对细胞的生长抑制率分别是8.21%、11.3%、19.4%、18.3%;作用48小时后对细胞的生长抑制率分别是16.2%、24.4%、32.0%、30.8%;作用72小时后其抑制率分别是13.3%、17.9%、26.5%、24.1%。在10-5-10-2g/L浓度范围内与阴性对照组比较差异均有显著性(P<0.01),并在10-5-10-3g/L范围内呈浓度依赖性,在48小时内呈现时间依赖性。OCT在10-3g/L时抑制作用最强,10-2g/L的抑制作用较10-3g/L弱。10-3g/L组与阳性对照组(5-FU 100mg/L)比较差异无显著性;(2)集落形成实验的结果显示:10-5-10-3g/L的OCT组集落形成数较阴性对照组减少,且差异有显著性(P<0.05);(3)OCT能够诱导人胃癌BGC-823细胞的凋亡,在10-5-10-3范围内呈浓度依赖性,在48小时内呈现时间依赖性,与对阴性照组比较差异有显著性(P<0.05)。AO-EB染色及流式细胞仪分析细胞凋亡结果基本一致;(4)10-5-10-3g/L的OCT作用人胃癌BGC-823细胞48小时后,能使G1期细胞百分数明显上升,S期细胞百分数明显下降,使细胞周期停滞于G1期,与对照组比较差异有显著性(P<0.05),;(5)OCT在10-5-10-3g/L范围内呈浓度依赖性的下调人胃癌BGC-823细胞中suvivin mRNA和蛋白的表达,10-5-10-3g/L的OCT组与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05);上调PTEN mRNA和蛋白的表达,10-5g/L的OCT与阴性对照组比较差异无显著性(P>0.05),10-4、10-3g/L的OCT组与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论:(1)OCT能够抑制人胃癌BGC-823细胞的增殖、诱导其凋亡、使细胞停滞于G1期,并在一定范围内呈浓度与时间依赖性;(2)OCT能够下调人胃癌BGC-823细胞中suvivin mRNA和蛋白的表达,上调PTEN mRNA和蛋白的表达;(3)OCT诱导人胃癌BGC-823细胞凋亡可能与引起G1期细胞阻滞、下调survivin、上调PTEN mRNA和蛋白的表达有关。
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