防治甜瓜枯萎病木霉菌REMI变异株筛选及生物安全性评价

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利用REMI技术进行木霉菌株改良是一个比较实用、有效的方法,可克服传统木霉菌稳定性差、防治效果不理想之不足。本文首先对本实验室成功构建的木霉菌REMI转化体是否存在假阳性问题做了鉴定。在此基础上,系统测定了木霉菌REMI变异株对甜瓜枯萎病的防治效果,同时对防治甜瓜枯萎病具有明显效果的木霉菌REMI变异株的安全I生进行了研究。通过木霉菌REMI变异株对宿主植物(农作物和杂草)生长、根际土壤中主要微生物种群以及对水资源安全性、鱼苗生长等生态因子的影响研究,明确了木霉菌REMI变异株的生物安全性,为今后木霉菌REMI变异株在生物防治中的安全应用提供了理论依据。 采用继代培养、抗潮霉素检测和PCR分子检测相结合的方法,确定了125个转化体(变异株)是由质粒插入到初发菌株T21染色体中,且生长特性稳定。同时,发现假转化体存在,需要进一步采用Southern blotting来检测。 通过PDA固体和PD液体培养筛选,从125个木霉REMI变异株筛选出22株生长速度快、产孢量大的优良菌株。22株木霉菌变异株对甜瓜枯萎病的防治试验表明,多数变异株的防效明显高于初发菌株T21,其中Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102等5个变异株的防效最好。Trtrm42、Ttrm26的室内防效为78.7%和74.7%,田间防效也分别达到78.1%和73.0%,显著高于对照苗菌敌的相对防效。同时发现,用Ttrm42和Ttrm26处理的甜瓜植株,生长健壮,叶片呈深绿色。 针对防治甜瓜枯萎病效果明显的变异株,研究了其在甜瓜根际土壤中的定殖,结果表明,Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102等5个变异株均可以在甜瓜根际土壤中定殖,其中Ttrm42的定殖能力最强。 通过研究Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53和Ttrm102变异株对其宿主生长的影响发现,多数变异株对甜瓜种子和玉米种子安全,并且可以提高种子的出苗率、增长胚根和增加须根数,还可增加地上鲜重;大部分木霉菌变异株对甜瓜和玉米叶长、叶宽及株高等地上部生长性状有明显促进作用,且植株健康无病,叶片大、叶色绿、须根多;Ttrm25、Ttrm26和Ttrm102能够促进稗草生长、增加地上鲜重和地上干重;Ttrm25、Ttrm26、Ttrm53、Ttrm102及初发菌株T21对反枝苋的生长有显著的抑制作用;Ttrm25、Ttrm26、Ttrm42、Ttrm53及初发菌株T21对苘麻地上部分的生长有明显的促进作用。 木霉菌变异株对甜瓜根际主要微生物种群数量有明显影响。Ttrm102、Ttrm26、Ttrm42处理的甜瓜根际土壤的真菌数量与对照相比明显减少,其中Ttrm42处理的真菌数量最少;Ttrm53、Ttrm102处理的甜瓜根际土壤的细菌数量与对照相比有所增加;木霉菌变异株对甜瓜根际放线菌的种群数量影响相对较小。关于木霉菌变异株对水资源的安全性及对鱼类的影响。木霉菌变异株的孢子在自来水和和河水中均不萌发,存活能力较差,菌体自行消解。所以,对水资源不能造成污染,对鱼类的生长无不良影响。
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