决明子来源于豆科植物决明Cassia obtusifolia L.或小决明Cassia tora L.的干燥成熟种子,具有清热明目,润肠通便的功效。是卫计委公布的101种药食同源中药材之一,常用作水煎服或代茶饮的保健品,在减肥、降脂、明目、保肝等领域应用广泛。然而近年来以何首乌为代表的含蒽醌类中药保健品副作用的报道频繁,其潜在的安全问题越来越受到人们的重视。由于决明子作为保健食品原料药食用时的安全与功效方面技术标准与基础研究不足,迄今未形成相关使用规范和技术标准。其作为保健食品原料的常用剂量为《中国药典》正常人体推荐剂量的1/3(3g),服用时间长短不一存在较大的随意性,因此在上述剂量下服用是否能够发挥相应保健功效,同时有无安全隐患,尚无定论,同时现有研究结果提示两种决明子化学成分存在差异,作为两基原药材,二者等同入药,是否能够保证临床疗效,有待于进一步深入研究。论文将对决明小决明药效物质基础含量进行系统的对比研究,为二者等同入药提供科学依据,以决明子降血脂功效为研究背景,进行安全性初步研究,为安全、合理的使用决明子提供依据。研究内容如下:1两基原决明子药效物质基础对比研究1.1蒽醌类成分蒽醌为决明子主要药效物质基础,研究结果表明两个基原之间蒽醌成分存在差异,目前关于两基原蒽醌含量比较研究报道较少,因此论文对二者的蒽醌含量进行对比研究。结果首次建立“一测多评(QAMS)”测定决明子中7种蒽醌含量的分析方法,以大黄素为参照的相对校正因子分别为f橙黄决明素/大黄素=1.403、f芦荟大黄素/大黄素=0.521、f大黄酸/大黄素=0.434、f黄决明素/大黄素=1.749、f大黄酚/大黄素=0.562、f大黄素甲醚/大黄素=0.895。采用UV法测定决明子中总蒽醌、总游离蒽醌与结合蒽醌。两种方法所测结果表明两基原之间蒽醌含量差异显著,决明蒽醌含量均高于小决明。采用最小偏二乘法(PLS)分析二者蒽醌含量的差异,根据分组变量的贡献值(VIP>1),选取大黄素、橙黄决明素、大黄酚、芦荟大黄素为标志物,说明上述4种蒽醌或其对应的蒽醌苷是造成不同基原决明子蒽醌含量存在差异的主要因素。1.2萘并吡喃酮类成分决明子萘并吡喃酮类成分具有保肝,抗肝病毒的药理活性,论文对决明子中红链霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的含量进行对比研究。建立的方法以甲醇为提取溶媒,采用水浴回流的提取方式,HPLC法测定决明子中红链霉素-6-O-β-龙胆二糖苷的含量,结果10批次决明的含量在2.48%~4.42%之间,平均值为3.12%,产自内蒙的含量最高。10批次小决明含量在2.38%~4.37%之间,平均值为2.92%,产自河南鹤壁的含量最高,结果两基原决明子中红链霉素-6-O-β-龙胆二糖苷含量无明显差异。1.3脂肪酸类成分决明子脂肪酸含有丰富的亚油酸、亚麻酸,具有降血脂、降低胆固醇的药理活性,目前未有关于二者脂肪酸类成分含量比较研究,论文以石油醚回流提取并测定二者的含量,结果不同基原的两种决明子脂肪酸含量无明显差异。将脂肪酸甲酯化后采用GC-MS-AMDIS结合保留指数定性定量分析不同基原决明子脂肪酸组分差异。结果决明中化合物种类较小决明丰富,花生酸甲酯含量较小决明高,cis-15-十四酸甲酯不及小决明。主要共有的脂肪酸为棕榈酸、十七酸、顺-9-十八碳烯酸、亚油酸、亚麻酸、二十二烷酸等,上述6种化合物相对含量总和在65%~80%之间,表明二者不饱和脂肪酸类成分组成具有很高的相似性。1.4 UPLC指纹图谱对比研究目前文献报道决明子指纹图谱均为水解后的蒽醌类成分,操作繁琐、专属性差,同时未见有对其他成分的指纹图谱的研究报道。论文首次建立了决明子萘并吡喃酮类成分与蒽醌类成分的UPLC指纹图谱方法,并对二者化学成分进行比较研究。结果决明与小决明两个基原在色谱图上存在一定的共性差异,二者所含成分基本一致,而仅在个别成分的相对含量上存在差异,主要表现在3、5、8号峰,色谱峰在25min后,决明色谱图较小决明谱图丰富,各共有峰峰面积更大,说明决明小极性的游离蒽醌类成分比小决明含量高。因此25min后的色谱峰可作为两个品种的指纹识别区,进而直接从指纹图谱来辨识两者的基源。综上,论文分别从上述3类成分进行两基原对比研究,结果除决明蒽醌类成分含量高于小决明外,决明与小决明两个品种化学成分基本一致,而共同成分的相对含量则存在差异,该差异是否对二者的药理作用或药效产生影响,需要进一步研究。2决明子安全性与有效性研究2.1决明子降血脂功效的药效学研究动态观察不同剂量决明子水煎剂对营养性高脂血模型大鼠的降脂作用,模型建立后分为空白组、模型组、阳性组(血脂康,0.2g·kg-1)及5个决明子水煎剂(以含生药计)0.315、0.945、1.575、3.15、6.3g·kg-1,连续灌胃90d,分别于给药第14、35、56、77、90d检测动物体重及血清中TC、TG、HDL-C、LDL-C、AI及90d肝组织中TC、TG、MDA、T-SOD,结果灌胃给药至56d,阳性组、3.15g·kg-1、6.30g·kg-1两个给药组血清TC、TG、LDL-C、AI水平显著降低(P<0.01,P<0.05),HDL-C水平显著升高(P<0.01,P<0.05),灌胃给药至77d,1.575g·kg-1组TG、LDL-C、AI有显著降低(P<0.01,P<0.05),灌胃给药至90d,0.315、0.945g·kg-1组血清血脂水平变化无显著性差异(P>0.05);阳性组、3.15g·kg-1、6.30g·kg-1组肝组织TC、TG水平显著降低(P<0.01),各给药组均能够显著(P<0.01,P<0.05)升高大鼠肝组织中T-SOD的活力至正常程度,对MDA活力则无影响(P>0.05);决明子各给药组大鼠体重与模型组比较均无统计意义(P>0.05);结果提示决明子水煎剂对高脂血模型大鼠具有降血脂功效,并与决明子给药量存在一定的量效关系,给药56d后大剂量(1.575 g·kg-1)组出现稳定持续的降脂效果。2.2低剂量长期服用下的决明子安全性初步研究低剂量长期服用决明子是否存在潜在毒性,国内外目前未见研究报道。论文以决明子降血脂功效为研究背景,探讨其是否对大鼠的存在毒副作用。观察发现给药期间各给药组出现毛色发黄,尿液深黄、精神萎靡不振、便溏泻下的症状。组织的病变检查结果得出,各剂量组均可能存在毒副作用,与决明子给药量成正相关。肝组织病理切片可见肝细胞空泡样变、肿胀变性、局灶性核固缩、坏死,肝窦扩张炎细胞浸润等病变。肾组织病理切片可见肾小管上皮细胞肿胀变性、肾间质内炎细胞浸润等。血清中相关指标检测结果显示,决明子给药组血清中的天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)指标与模型组相比具有显著性差异(P<0.01,P<0.05),血清检测结果与肝组织病理切片一致。提示长期服用决明子可能存在一定的安全隐患。