2-氨基-3-苯基丙酰肼作为SSAO抑制剂的研究

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氨基脲敏感型氨氧化酶(SSAO, EC1.4.3.6)是一类普遍存在于植物、动物和微生物中的酶,能催化体内外的伯胺类化合物生成相应的醛、过氧化氢(H2O2)和氨(NH3)。研究发现在炎症、肝病、高血压、糖尿病、动脉粥样硬化等病人体内 SSAO活性增高。SSAO催化反应产物醛类可引起蛋白质分子间、蛋白质和DNA分子间、或DNA分子内的不可逆交联;它易与多种生物分子发生化学反应,如与一元胺或氨基化合物形成大分子加成物,产生不可逆的共价结合;也可以与谷胱甘肽结合,从而影响生物大分子的活性及功能,引起细胞病变。SSAO催化生成的H2O2是主要的活性氧族,具有一定的细胞毒性,体内过量的H2O2可加剧氧化应激。当机体SSAO活性增高或者醛类代谢受阻时,醛类和H2O2累积可能通过增强机体醛-氧化应激,导致细胞衰老、神经退行性病变(阿尔兹海默病)和糖尿病并发症等的发生。SSAO对氨基脲等羰基试剂敏感,氨基脲属于肼类抑制剂。肼类抑制剂不仅可以抑制SSAO活性,还能和醛类分子结合,因此寻找对SSAO抑制效果好,并能与醛类分子有效结合的肼类抑制剂具有科学意义。  主要研究内容和方法:  一、根据文献合成2-氨基-3-苯基丙酰肼  用L-苯丙氨酸和水合肼合成2-氨基-3-苯基丙酰肼,通过核磁共振氢谱、红外光谱、质谱鉴定其结构。  二、研究2-氨基-3-苯基丙酰肼对SSAO的抑制效应  采用本实验室已建立的方法检测2-氨基-3-苯基丙酰肼对牛血清中SSAO的抑制率。利用2-氨基-3-苯基丙酰肼对SSAO抑制曲线,计算其IC50;用透析实验确定2-氨基-3-苯基丙酰肼对SSAO的抑制类型。  三、建立高效液相色谱法测定2-氨基-3-苯基丙酰肼在水溶液中的浓度,验证其抑制类型。  利用2-氨基-3-苯基丙酰肼在硼酸钠介质中与丹磺酰氯发生反应,检测其衍生物的浓度。  实验结果:  一、根据结构检测数据推测合成化合物为2-氨基-3-苯基丙酰肼。  二、2-氨基-3-苯基丙酰肼对SSAO的IC50为0.76μmol/L。  三、透析后透析原液中2-氨基-3-苯基丙酰肼浓度为0.07μmol/L,对照其抑制曲线算出该浓度对SSAO的抑制率在10%左右,显著低于实际测得的抑制率(78%)。由结果我们推测2-氨基-3-苯基丙酰肼是SSAO不可逆抑制剂。  结论:  2-氨基-3-苯基丙酰肼对SSAO抑制效果好,且是SSAO的不可逆抑制剂。
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