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血管内皮生长因子VEGF(Vascular Endothelial Growth Factor)是一类与肝素结合的生长因子，对血管内皮细胞具特异的致分裂作用，可促使内皮细胞分裂增殖，促进新血管的形成，同时还可有效地提高血管的通透性。而VEGF的这些生物效应是通过其特异性受体VEGFR(VEGFReceptor)介导发挥的。现已发现的VEGFR有三种，其中Flt-1(the fms-like tyosine kinase)为第一类受体，KDR(Kinase insert domain-containing receptor)为第二类受体，Flt-4为第三类受体。 Flt-1基因全长7680 bp，编码区为4014 bp，编码1338个氨基酸。Flt-1由胞外区、跨膜区和胞内区组成。胞外区由758个氨基酸组成，包括N端31个氨基酸的信号肽和七个类似免疫球蛋白(Ig)的结构域。其中，胞外第二个结构域含有与配基结合的决定簇，与配基结合后，Flt-1胞内区酪氨酸激酶被激活，从而产生信号，介导内皮细胞的迁移和粘附，同时还对KDR介导的增生信号起调节作用。 从人脐静脉内皮细胞中提取得到总RNA，以其为模板，通过RT-PCR扩增获得编码Flt-1胞外1～4结构域的基因片段sFlt-1 cDNA，将sFlt-1cDNA片断克隆至pUC18载体进行测序，测序结果表明，sFlt-1基因在850bp和1168 bp处均发生了A→G突变，两处突变分别位于第三、第四结构域中，不影响sFlt-1的生物学活性。 首先在链霉菌中进行了sFlt-1的克隆表达。采用两种不同信号肽vsi和gPP来介导sFlt-1在链霉菌中的分泌表达，将sFlt-1 cDNA片段克隆至新型链霉菌—大肠杆菌穿梭质粒载体pSGLgpp的gPP信号肽下游；另外将vsi信号肽与sFlt-1 cDNA片段融合，融合片段克隆入链霉菌—大肠杆菌穿梭质粒pUWL-219，分别转化S.lividans TK24，获得的重组菌分别命名为S.lividans[pSGLgpp-F]和S.lividans[pUWL219-vsi-F]。 收集不同时间重组菌的发酵上清进行胞外分泌研究。SDS-PAGE、Western blot及受体配基结合实验结果表明：重组菌株S.lividans[pSGLgpp-F]能够表达分子量为48.7kDa的重组蛋白sFlt-1，并且表达的sFlt-1具有免疫学活性和生物活性。重组菌株