论文部分内容阅读
目的:编码组成型活性丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶的致癌基因PIM1参与细胞增殖,存活,分化和凋亡的调节。其表达的上调也与各种肿瘤的发生和发展密切相关。最近,有越来越多的文献报道PIM1介导细胞衰老的作用,其确切机制尚不清楚。此外,在随后的研究中,细胞衰老越来越被视为对抗癌发生的保护机制。因此,探索新的衰老机制可能为癌症的治疗提供新的思路。方法:通过使用FLAG-M2珠子免疫沉淀具有Flag-PIM1过表达的2BS细胞的细胞提取物,然后通过SDS-PAGE电泳解析,在银染后进行质谱分析筛选PIM1相关蛋白。接下来在2BS细胞中过表达相关质粒,利用co-ip和pull-down以及免疫荧光实验进一步验证筛选出的目的蛋白SND1与PIM1是否相互结合。然后我们利用激酶实验以及western-blot实验进一步验证了SND1是否能被PIM1磷酸化。既然PIM1能磷酸化SDN1,那之后是否会引起细胞衰老呢,具体机制又是什么呢?紧接着我们敲低SND1并利用免疫荧光、免疫组化、CCK8、EDU、β-gal实验来验证我们的猜想。最后我们在2BS细胞中敲低SND1然后测序,目的是观察本研究引起了衰老改变的哪些方面,并利用RT-PCR来验证测序的结果。结果:首先我们利用质谱分析以及体内外免疫共沉淀的方法发现PIM1与SND1能够直接相互作用。接下来我们利用体内磷酸化实验以及体外激酶实验证实了PIM1能够磷酸化SND1并且促进其降解。然后我们做了相关的功能实验,如β-gal实验、EdU、CCK8等,证实了SND1参与了致癌基因PIM1引起的细胞衰老。最后我们还通过RNA-seq和qPCR发现了SND1还参与了衰老相关分泌表型(SASP)的调节。结论:致癌基因PIM1是丝氨酸/苏氨酸激酶,其在细胞衰老的调节中起重要作用。许多文献已经发表了PIM1在调节恶性细胞生长和转化中的作用,而PIM1在衰老中的作用最近才被报道。在本研究中,我们提供了证据表明PIM1磷酸化SND1并促进其降解导致细胞衰老,并且SND1也参与SASP的调节。这一发现可能是PIM1驱动细胞衰老的新机制。总之,我们认为SND1可以通过调节SASP来促进PIM1诱导的衰老。值得注意的是,SASP调节是把双刃剑,主要取决于其所在的生物环境。因此,当PIM1抑制剂或SND1抑制剂用于临床中的癌症治疗时,应该考虑这一点。