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目的:研究体细胞核移植胚胎(somatic cell nuclear transfer,SCNT)致密化起始时卵裂球的数目以及致密化前后卵裂球表面微绒毛的分布变化,进而探讨克隆胚胎发育异常的原因。
方法:以B6D2F1小鼠为研究对象,以胞质内单精子注射(intracytoplasmic sperm injectioN,ICSI)胚胎为对照组,光镜(200×)下观察记录SCNT胚胎的卵裂球数目。收集SCNT胚胎、受精卵胚胎、孤雌胚胎、2.细胞阶段电融合获得的四倍体胚胎,利用扫描电镜比较各类型胚胎表面微绒毛的分布变化。
结果:在2-细胞、4-细胞阶段,受精卵胚胎、孤雌胚胎、四倍体胚胎以及ICSI胚胎、SCNT胚胎的发育率差异均不显著(P>0.05)。在8-细胞、桑椹胚阶段,受精卵胚胎、孤雌胚胎、四倍体胚胎以及ICSI胚胎的发育率之间没有差异,然而SCNT胚胎的发育率显著低于前四种胚胎(P<0.05)。致密化起始时,SCNT胚胎卵裂球数目为8的样本仅占12.96%(7/54),而卵裂球数目为3、4、5、6、7的百分率分别为5.56%,9.26%,9.26%,31.43%,31.43%。致密化前,微绒毛均匀分布在克隆胚胎卵裂球表面;致密化后,则局限分布于卵裂球顶膜区。另外,本实验发现克隆胚胎的致密化时程平均为63.7949h,然而其对照组ICSI胚胎为61.0263h,两者之间差异显著(P<0.05)。然而,SCNT和ICSI胚胎发育至4-细胞阶段的时程之间差异不显著(P>0.05)。
结论:1、早期发育过程中,SCNT胚胎在2,4.细胞阶段的发育能力较好,在8.细胞、桑椹胚阶段较差。2、SCNT胚胎致密化起始延迟,可能会影响胚胎的后续发育。SCNT胚胎在致密化起始时较少的卵裂球数目可能会降低囊胚质量。3、致密化前后,SCNT胚胎卵裂球表面微绒毛发生极性化变化,与受精卵胚胎、孤雌胚胎、四倍体胚胎变化一致。