【摘 要】
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约氏疟是由约氏疟原虫引起的疟疾,主要发生在非洲,其宿主为鼠。由于不同疟原虫之间的表面抗原有很多同源性非常高,结构高度保守,故约氏疟原虫在实验室常用来免疫小鼠,在免疫反应中
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约氏疟是由约氏疟原虫引起的疟疾,主要发生在非洲,其宿主为鼠。由于不同疟原虫之间的表面抗原有很多同源性非常高,结构高度保守,故约氏疟原虫在实验室常用来免疫小鼠,在免疫反应中作为一种模型为其他疟疾的研究提供参考。 Pys25和Pys48分别是约氏疟原虫有性生殖阶段动合子时期和配子体时期的表面抗原,其结构均高度保守,且已有的研究显示其抗体均有显著的传播阻断效应。我们选择其进行研究,通过原核表达和家蚕表面展示表达目的蛋白,单独免疫制备抗体和联合免疫(Pys25+Pys48)制备抗体,比较其传播阻断效果,目的在于验证家蚕表达系统的优越性,在于验证两种抗原同时免疫是否具有协同性,在于为后期多时期多价疫苗的构建奠定基础,在于建立一种鼠疟模型,为其他疟疾的研究提供参考。 首先,我们构建原核重组表达菌BL21-pGEX-4T-1-Pys25和Rosseta-pET-32a-Pys48,分别经IPTG诱导表达后,高压破碎菌体,离心分上清沉淀,Pys25上清直接用GST柱亲和纯化;Pys48几乎都表达在沉淀,我们用洗包涵体的方法获得较纯的目的蛋白。重组蛋白经浓缩、BCA定量后,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体。同时,我们利用家蚕表面展示系统原理,改造pFastBacDual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,构建重组病毒vBmPys25、vBmPys48,在家蚕细胞中成功表达重组蛋白,经免疫荧光检测,激光共聚焦显微镜观察目的蛋白成功展示在细胞膜表面,经超速50000rpm离心获取杆状病毒粒子,免疫Balb/c雌鼠,获得多克隆抗体。本实验为后续的传播阻断试验及多时期多价疫苗鼠疟模型的构建奠定了基础,为其他疟疾P25和P48蛋白的研究提供参考。
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