美洛昔康(meloxicam)为烯醇酰胺类的新型非甾体抗炎药(NSAIDS),为COX-2选择性抑制剂,具有良好的镇痛、抗炎作用。因该药不良反应少,许多国家已用之代替其他非甾体抗炎药,广泛应用于镇痛、抗关节炎(OA)和类风湿性关节炎(RA)及其他急慢性炎症。美洛昔康也是目前众多获批的用于犬临床的非甾体抗炎药(NSAIDs)中的一种。在欧洲批准的犬用美洛昔康制剂有注射剂、片剂和口服混悬液,可用于缓解犬急性和慢性肌肉骨骼疾病引起的炎症和疼痛。本研究在建立犬血浆中美洛昔康含量测定的高效液相色谱法基础上,以美洛昔康原研药为参比品进行国产仿制品生物等效性试验,以确定国产美洛昔康咀嚼片和原研药是否具有临床可替代性,为国产美洛昔康咀嚼片的临床合理用药提供依据。1.建立犬血浆中美洛昔康含量高效液相色谱法测定方法犬血浆中美洛昔康采用液液萃取法提取,采用AgilentHC-C18(250×4.6mm,5μm)色谱柱和等度洗脱对待测样品中的各成分进行分离,采用Agilentl260色谱系统进行定量分析,外标法定量。流动相:乙腈:0.1%磷酸水溶液(pH2.5)=65:35(V/V),流速:lmL/min,柱温:35℃,进样量为20μL,紫外检测波长λ=355nm。在本试验条件下,美洛昔康在0.05～5μg/mL浓度范围内线性关系良好,相关系数达到0.999。检测限(LOD)为0.02μg/mL,定量限(LOQ)为0.05μg/mL。美洛昔康三个空白血浆添加浓度样品(0.05、1、5μg/mL)的回收率均在82%～108%之间,变异系数均小于8%。稳定性试验结果表明,美洛昔康储备液在冻存条件下、待测样品在冻存和室温下放置,以及反复冻融下待测物均具有良好的稳定性。本试验建立的犬血浆中美洛昔康含量的HPLC测定方法可用于犬血浆中美洛昔康含量的测定。2.美洛昔康咀嚼片在犬体内药动学及生物等效性研究18只体重较为一致的雄性健康比格犬,随机分为2组,采用交叉实验设计。第一阶段1-9号犬单剂量(0.25mg/kgbw)口服给药受试美洛昔康咀嚼片,10-18号犬单剂量(0.25mg/kgbw)口服给药参比美洛昔康咀嚼片;第二阶段1-9号犬单剂量(0.25mg/kgbw)口服给药参比美洛昔康咀嚼片,10-18号犬单剂量(0.25mg/kgbw)口服给药受试美洛昔康咀嚼片。两阶段药物清洗期为2周。给药后按预定时间点采集血样。采用经验证的HPLC法测定血浆样品中的美洛昔康浓度。实测血浆药物浓度-时间数据采用Winnonlin6.4药动学软件拟合药代动力学参数。犬单剂量口服美洛昔康咀嚼片受试品和参比品后,平均消除半衰期(t1/2)分别为(19.0±5.4)h 和(21.3±3.4)h,达峰时间(Tmax)分别为(4.1±2.1)h 和(4.9±1.6)h,达峰浓度(Cmax)分别为(0.896±0.159)μg/mL 和(0.816±0.203)lμg/mL,平均滞留时间(MRT)分别为(20.6±3.1)h和(22.5±2.7)h,平均药时曲线下面积(AUC0～t)分别为(22.121±3.1μg·h·mL-1和(19.807±3.963)μg·h·mL-1。以美洛昔康原研产品为参比,受试品的相对生物利用度(F)为111.81%。药动学研究结果显示,美洛昔康咀嚼片口服给药在犬体内消除较慢,且受试品与参比品在犬体内具有相似的药动学特征。统计学分析表明,美洛昔康咀嚼片受试品和参比品的主要药代动力学参数间均无显著性差异(p>0.05)。采用WINNONLIN 6.4版药代参数计算软件分别对美洛昔康受试品与参比品的Cmax(经对数转换)、AUC0-t(经对数转换)和AUC0-∞(经对数转换)进行生物等效性检验,美洛昔康受试品与参比品Cmax的对数均值之比为109.93%,90%置信区间分别为96.63%～125.06%,美洛昔康受试品Cmax的90%置信区间介于参比品70%～143%范围之间;美洛昔康受试品与参比品AUC0-t的对数均值之比为111.81%,90%置信区间为103.56%～120.72%;美洛昔康受试品与参比品AUC0-∞的对数均值之比为112.68%,90%置信区间为104.38%～121.63%。美洛昔康受试品AUC的90%置信区间介于参比品80%～125%范围之间。依据制剂生物等效性评价标准,国产美洛昔康咀嚼片与进口同类药物生物等效,表明国产美洛昔康咀嚼片与进口同类产品在临床上可相互替代。