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目的：Cytohesins是一种小GTP结合蛋白酶,为ADP核糖基化因子的鸟苷酸交换因子。近来有研究提示,Cytohesins参与了肺癌细胞系中ErbB家族信号通路的激活,刺激肿瘤生长。本实验探讨Cytohesins在结直肠癌细胞增殖中的作用,及作用机制。方法：免疫组化法检测临床结直肠癌标本中ARNO的表达情况。然后用RT-PCR法,免疫荧光法检测几种常见结直肠癌细胞系HT29, SW620, SW480, HCT116中Cytohesins四种亚型(cyhesin-1; Cytohesin-2/ARNO; Cytohesin-3/Grp-1; Cytohesin-4)的表达情况。用SecinH3阻断或ARNO-siRNA干扰敲除ARNO处理直肠癌细胞系HT29和HCT116,检测其对EGFR信号通路下游分子ARNO、 p-EGFR、pIRS1、pShc和pERK1/2激活情况；同时通过上述方法检测ARNO、 pIGF-IR、pIRS和pAKT等分子来探讨其对IGF-IR信号通路的影响。MTT及Transwell法检测用Cytohesins的阻断剂SecinH3阻断结直肠癌细胞系HT29, HCT116作用后24h,48h,72h肿瘤细胞的增殖侵袭及迁移情况,ARNO-siRNA干扰敲除ARNO处理24h,48h后肿瘤细胞HT29的增殖情况。将处理后的细胞做流式检测细胞周期分布。用SecinH3阻断结直肠癌细胞系HT29, HCT116中Cytohesins; ARNO-siRNA干扰敲除ARNO,收集细胞行WesternBlot检测HT29细胞中EGFR通路分子激活的情况,HCT116细胞中IGF-IR通路分子激活情况。体内试验中将HT29细胞接种在裸鼠皮下成瘤,检测小鼠生长及肿瘤生长状况；最后对其体内肿瘤进行免疫组化及常规病理分析,了解其坏死及增殖情况。结果：临床标本检测,ARNO在结直肠癌组织中高表达,正常组织中低表达。Cytohesins在所测的结直肠癌细胞系HT29, SW620, SW480, HCT116中均有表达；四个亚型中,Cytohesin-2(ARNO)表达较高。免疫荧光法检测以上肿瘤细胞系胞质内近胞膜处均可检测到ARNO的表达。SecinH3阻断或ARNO-siRNA均发现EGFR信号通路相关分子ARNO、p-EGFR、pIRS1、pShc和pERK1/2激活受到抑制,同样方法处理后,IGF-IR下游相关分子ARNO、pIGF-IR、pIRS和pAKT也受到抑制。在细胞增殖实验中,SecinH3阻断结直肠癌细胞系HT29中的Cytohesins,导致细胞生长受抑制,其中HT29细胞在SecinH3浓度为20uM时,作用72h后细胞增殖抑制百分比为57.22±1.01%；ARNO-siRNA干扰ARNO的表达亦使该肿瘤细胞增殖受抑制,作用48h后HT29细胞增殖抑制百分比为58.95±3.42%。流式细胞仪检测SecinH3和ARNO-siRNA两种处理均使细胞停滞在G1期。小鼠成瘤一周后开始注射SecinH3,用药组肿瘤直径明显小于对照组,增殖受到抑制。结论：Cytohesin,尤其ARNO高表达与结直肠癌细胞中,并直接影响着结直肠癌细胞的EGFR及IGF-IR通路,对结直肠癌的增殖,生长,及转移有起到了重要作用,Cytohesin有可能成为结直肠癌的新的治疗靶点。