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木聚糖酶是一类木聚糖降解酶系,在食品、饲料领域应用广泛。但目前该酶的应用受到酶活低、热稳定性差、不安全等因素的制约。本文通过将食品级米曲霉系统和产木聚糖酶嗜热菌株有机结合起来,为木聚糖酶基因工程方法获得酶活高、工业成本低、安全的木聚糖酶研究提供新的思路奠定基础。主要实验结果如下:(1)对实验室前期保存的一株产木聚糖酶真菌TL01进行形态学、18S rDNA及产酶鉴定,其结果表明TL01为梳棉状嗜热真菌,测得粗酶活为0.250?0.03 U/mL;对其两种主要的木聚糖酶基因(xyn11A和xyl43)进行克隆和分子生物学分析。xyn11A预测蛋白分子量24.36 kDa,等电点为4.77,含有19个氨基酸的信号肽序列,属于亲水性蛋白,无跨膜结构域,其二级结构主要是无规则卷曲(44.89%);xyl43蛋白分子量38.24kDa,等电点为5.23,编码的胞内蛋白属于亲水性蛋白,无跨膜结构域,无规则卷曲(59.76%)是其主要的二级结构。(2)通过紫外诱变技术并结合表型、测序验证得到一株pyrG营养缺陷型菌株RIB40△pyrG。将pyrG筛选标记、启动子及信号肽amyB、终止子amyBt、组氨酸标签及报告基因GFP连入质粒pBC-Hygro中,构建表达载体pBC-Hygro.4。将载体通过PEG法转入米曲霉RIB40△pyrG,使用荧光显微镜观察可看到发出荧光的菌丝体,证明载体构建成功。(3)构建木聚糖酶-米曲霉表达载体pBC-Hygro-xyn11A和pBC-Hygro-xyl43并转入米曲霉RIB40△pyrG。通过菌落PCR鉴定成功筛选到两种木聚糖酶-米曲霉表达宿主菌。这也是首次构建木聚糖酶-米曲霉表达系统,为后续进一步进行木聚糖酶高效表达研究奠定基础。