马铃薯青枯病病原菌的噬菌体分离、鉴定及应用研究

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马铃薯(Solanum tuberosum L.)为茄科双子叶植物,是世界上仅次于小麦、水稻、玉米的第四大粮食作物。马铃薯的主要病虫害有细菌性疾病、真菌性病害和病毒性疾病。其中细菌性疾病,由于多年抗生素农药的大量使用,产生了抗性菌株,严重威胁马铃薯的产量。近年来的研究显示噬菌体在克服植物的细菌性病害方面具有绿色、天然、高效等优点,具有广泛应用前景。青枯病是马铃薯中极为严重的一种细菌性病害,马铃薯一旦患青枯病,会减产80%。本研究为了提高噬菌体制剂的杀菌效果和降低病原菌对噬菌体制剂产生抗性的可能性,首先从多个环境水中,包括6个肯尼亚水样,新筛选了12株针对青枯病病原菌的裂解性噬菌体,并对其进行了多种表征测试。所分离到的12株噬菌体,在平板上的噬菌斑直径大小从0.1 cm到0.6 cm不等,最佳感染复数从(MOI)10-5到10-2不等,裂解曲线表明不同的噬菌体对宿主菌的裂解能力不同,且混合噬菌体制剂对宿主菌的裂解能力明显强于单一噬菌体制剂。也选取了几株分别进行了基因组大小、电镜的表征以及基因组测序。基于这些结果,我们配制了2个噬菌体混合制剂并测试了在盆栽模型中对于马铃薯青枯病的防控效果。结果显示由P-PSG-6、P-PSG-8、P-PSG-10和P-PSG-12共4种单一噬菌体混合而成的P1混合噬菌体制剂对病原菌标准株GIM1.74(弱致病株)和分离株PS-X4-1(强致病株)的预防效率分别为80%、60%,在接种病原菌标准株GIM1.74后第3天和第6天第一次给药时,对青枯病的治疗效率都为60%;由P-PSG-1、P-PSG-2、P-PSG-3、P-PSG-7、P-PSG-8、和P-PSG-9共6种单一噬菌体混合而成的P2混合噬菌体制剂对病原菌标准株GIM1.74和分离株PS-X4-1的预防效率都为80%,在接种病原菌标准株GIM1.74后第3、6、9和12天第一次给药时,对青枯病的治疗效率分别为80%、100%、40%和20%。以上结果初步证明在田间大规模使用噬菌体制剂防控马铃薯青枯病的可行性,在移栽到土地之前,可用噬菌体制剂预先处理种薯或幼苗或预先用噬菌体制剂喷洒处理马铃薯种植地的土壤,以达到预防马铃薯青枯病的目的。
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