丹参素对小鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用和作用机制的研究

来源 :中国人民解放军医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tzsxf668
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第一部分:建立肾脏缺血再灌注损伤小鼠模型目的:成功建立肾脏缺血再灌注损伤小鼠模型,为后续实验提供支持。方法:BALB/c小鼠,6-8周龄,20-25g,雄性,30只,随机选择24只作为肾缺血再灌注损伤模型组,术后观察生存率,测血肌酐,切取肾脏进行HE染色;其余6只作为对照组只开腹、分离肾蒂,切除右侧肾脏,不做其他任何处理,术后测血肌酐,切取肾脏进行HE染色。结果:模型组术后生存率达91.67%,与对照组比较肌酐的值明显升高,肾脏出现典型病理损伤。结论:小鼠肾脏缺血再灌注损伤模型建立成功,术后生存率较高,肾功能明显受损,肾脏出现典型病理损伤,符合实验要求。第二部分:在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中丹参素作用的研究目的:明确丹参素在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中的作用。方法:BALB/c小鼠,6-8周龄,20-25g,雄性,20只,随机分为sham组、IRI组、IRI-15mg组、IRI-30mg组、IRI-60mg组. IRI组、IRI-15mg组、IRI-30mg组、IRI-60mg组根据第一部分手术方式建立缺血再灌注损伤模型,其中IRI-15mg组、IRI-30mg组、IRI-60mg组使用不同剂量丹参素进行干预,术后采集血清和肾脏等标本,肾组织标本通过HE染色观察肾脏组织形态学变化;检测血清标本肌酐、尿素氮的值。结果: IRI-30mg组(113.95+2.91、48.44+1.81)、IRI-60mg组(86.12+3.13、40.63+3.49)的肌酐、尿素氮水平均低于IRI组(169.54+5.15、71.48+4.92),结果有统计学意义(P<0.001、P<0.001;P<0.001、P<0.001);IRI-15mg组、IRI-30mg组、IRI-60mg组之间进行比较,差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.01;P<0.001、P<0.01);IRI-15mg组、IRI-30mg组、IRI-60mg组的病理损伤程度依次减轻。结论:丹参素能够减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤。第三部分:在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中丹参素作用机制的研究目的:阐明在小鼠肾脏缺血再灌注损伤中丹参素的作用机制。方法:通过RT-PCR检测IL-1β、IL-6、TNF-α的表达;通过化学比色法检测髓过氧化物酶水平;通过考马斯亮兰法检测肾组织标本蛋白浓度;通过黄嘌呤氧化酶法检测抗氧化酶——超氧化物歧化酶的水平;通过TBA法检测丙二醛含量。结果: IRI组的MPO活力(17.39+0.58)、IL-1β(2.35+0.06)、IL-6(2.38+0.06)、TNF-α(2.53+0.041)等代表炎症水平的指标明显高于sham组(11.44+0.54、0.97+0.08、1.03+0.05、0.99+0.06),差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.001、P<0.001、P<0.001);IRI组的SOD活力(120.57+2.94)显著低于sham组(156.08+9.06),而IRI组的MDA含量(17.29+0.65)显著高于sham组(11.11+0.71),差异均有统计学意义(P<0.05、 P<0.001、P<0.001、P<0.001).丹参素处理的IRI-60mg组(13.53+0.94)、IRI-30mg组(14.98+0.69)分别与IRI组(17.39+0.58)比较,MPO水平均显著低于IRI组,均有统计学差异(P<0.05、P<0.05),IRI-15mg组(16.44+0.63)MPO活力与IRI组(17.39+0.58)比较差异无统计学意义(P>0.05);丹参素剂量组之间进行比较,MPO水平:IRI-60mg组<IRI-30mg组<IRI-15mg组,差异均有统计学意义(P<0.05);IRI-60mg组与sham组比较,MPO活力高于sham组(11.44+0.54),差异有统计学意义(P<0.05).丹参素处理的IRI-60mg组(1.46+0.05、1.45+0.06、1.50+0.05)、IRI-30mg组(1.80+0.07、1.82+0.08、1.79+0.05)、IRI-15mg组(2.09+0.13、2.25+0.06、2.19+0.14)分别与IRI组(2.35+0.06、2.38+0.06、2.53+0.041)比较,IL-1β、IL-6、TNF-α的结果差异均有统计学意义(P<0.05);丹参素剂量组之间进行比较,IL-1β、IL-6、TNF-α表达:IRI-60mg组<IRI-30mg组<IRI-15mg组,差异均有统计学意义(P<0.05);IRI-60mg组与sham组比较,IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于sham组(0.97+0.08、1.03+0.05、0.99+0.06),差异均有统计学意义(P<0.001、P<0.001、P<0.001).丹参素处理的IRI-60mg组(137.38+2.85)、IRI-30mg组(131.08+3.96)分别与IRI组(120.57+2.94)比较,SOD活力差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.05),MDA含量(13.93+0.78、15.43+0.58)均低于IRI组(17.29+0.65),差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.05),IRI-15mg组SOD活力(124.42+2.76)、MDA含量(16.58+0.65)与IRI组比较均无统计学差异(P>0.05、P>0.05);丹参素剂量组之间进行比较,SOD水平: IRI-60mg组>IRI-30mg组>IRI-15mg组,差异均有统计学意义(P<0.05、P<0.05、P<0.05),MDA含量:IRI-60mg组<IRI-30mg组<IRI-15mg组,差异均有统计学意义(P<0.05、 P<0.05、P<0.05);IRI-60mg组与sham组比较, SOD活力低于sham组(156.08+9.06),结果有统计学意义(P<0.05),MDA含量高于sham组(11.11+0.71),结果有统计学意义(P<0.05).结论:丹参素减轻小鼠肾脏缺血再灌注损伤的机制是抗炎、抗氧化。
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