水稻逆境相关基因OXHS2的功能初步分析

来源 :中南民族大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:qingqing4452638
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由于降水不均和地理气候原因,致使许多作物面临着严峻的干旱问题,水稻尤为突出,因此,发掘抗旱相关基因,并且了解它们的抗逆机制,对于培育水稻抗旱性品种,提高水稻的抗旱性具有重要的生产实践意义。本研究前期发现新基因家族XHS在水稻的幼穗发育和逆境中起着重要的作用,该家族蛋白序列含有保守的XH,XS,Zf-XS和Coiled-Coil四个结构域。OXHS2是一个非典型XHS蛋白,缺少Zf-XS结构域,受干旱逆境的的强烈诱导。本研究拟通过启动子分析检测OXHS2的组织表达水平,亚细胞定位实验鉴定结构域Zf-XS是否具有核定位信号功能,并通过甘露醇渗透胁迫实验和苗期干旱胁迫实验鉴定OXHS2的转基因植株抗旱表型,初步确定OXHS2的抗旱性功能。具体结果如下:1.分离水稻基因OXHS2启动子,构建OXHS2promoter-DX2181启动子表达载体,利用农杆菌介导的遗传转化水稻受体中花11,获得10株阳性植株,荧光观察结果显示OXHS2在水稻雌蕊和气孔中有较强的表达,而在其它组织几乎不表达。暗示OXHS2可能在水稻雌蕊和气孔发育及相关功能上发挥着重要作用。2.通过RealTime PCR检测OXHS2转基因超表达和干涉家系,然后对各家系进行幼苗期渗透胁迫(100mM甘露醇)和苗期干旱胁迫实验。渗透胁迫实验结果显示:相比野生型ZH11,OXHS2超表达和干涉家系,在甘露醇胁迫下根长和苗长显著短于ZH11,干旱胁迫实验结果显示OXHS2超表达和干涉家系经过干旱复水后的存活率明显低于野生型ZH11。结果表明OXHS2可能是抗旱信号途经中的关键因子,在干旱早期可能发挥着正向调控作用,有助于水稻的早期抗旱,但随着干旱胁迫的持续,OXHS2的积累可能会影响水稻的生长造成伤害进而影响水稻的抗旱性。3.构建OXHS2-GFP-HBT和ZXHS2-GFP-HBT瞬时表达载体,转化水稻原生质体,荧光观察结果显示蛋白OXHS2定位于细胞质,而添加了Zf结构域后的蛋白ZXHS2定位于细胞核,初步证明Zf-XS结构域可能具有核定位功能。
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