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传统中药合欢皮为豆科植物合欢Albizzia julibrissin Durazz的干燥树皮。现代研究表明：合欢皮主要含皂苷、木质素、黄酮、生物碱及多糖等化学成分，具有镇静、抗肿瘤、免疫调控和抗生育等生物活性。本实验室前期研究结果显示：合欢皮总皂苷(Albizziaiulibrissin saponin，AJS)能显著促进卵清蛋白和禽流感疫苗免疫小鼠的细胞免疫应答和体液免疫应答，具有免疫佐剂活性。同事，在以佐剂活性指标为导向下，从中筛选、分离得到主要的有效部位——合欢皮皂苷佐剂活性部位(Albizzia julibrissin saponinadiuvant-active fraction，AJSAF)。为进一步研究合欢皮皂苷的免疫佐剂作用及其初步机制，本实验检测了AJSAF对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞株的调控作用、AJS及其流份对OVA免疫小鼠迟发性超敏(DTH)反应以及AJSAF对新城疫活疫苗受免鸡免疫应答反应的影响，为合欢皮皂苷作为疫苗佐剂在兽医临床上的应用提供依据。
1.AJSAF对小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞免疫学行为的影响
本实验选择小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞为模型，检测其对巨噬细胞增殖、吞噬活性以及细胞因子产生的影响，研究了AJSAF对巨噬细胞的免疫调控作用。并进一步采用RT-PCR检测对巨噬细胞炎症因子和趋化因子mRNA表达的影响，初步探讨了AJSAF对巨噬细胞免疫调控作用的可能机制。采用MTT法测定了AJSAF对RAW264.7细胞生长的影响。结果表明：AJSAF在浓度不高于1.25μg/ml的范围内，对RAW264.7细胞增殖无显著影响。在此基础上，研究了AJSAF对RAW264.7细胞吞噬活性和细胞因子分泌的影响。结果显示，AJSAF能显著增强RAW264.7细胞的吞噬活性，并浓度依赖性地促进细胞因子TNF-α和IL-10的分泌水平。进一步采用RT-PCR分析AJSAF对RAW264.7细胞炎症因子和趋化因子基因表达的影响。AJSAF可显著上调RAW264.7细胞COX-2(环氧化酶2)、iNOS(诱生性一氧化氮合酶)、TNF-α、IL-10等炎症因子和测试的多个趋化因子的基因表达，且呈时间、浓度依赖性关系。这些结果表明：AJSAF可显著促进巨噬细胞的活化和功能。本实验结果为AJSAF的进一步开发研究提供了科学依据。
2.AJSAF及其流份对OVA免疫小鼠迟发型超敏反应(DTH)的影响
我们以100μg OVA单独免疫或与Alum(200μg)、QuilA(10μg)、AJS及其流份(50μg、100μg和200μg)联合免疫ICR小鼠，免疫后5天再每只小鼠后肢脚垫皮下注射100μgOVA进行刺激。分别在刺激前和刺激后24h测定小鼠脚垫厚度，计算小鼠脚垫肿胀度，并将OVA和皂苷的联合免疫组与OVA对照组进行比较。结果表明，AJS及其流份FE50和FE75免疫组小鼠的脚垫肿胀度显著大于OVA对照组，说明AJS及其流份FE50和FE75能显著地促进OVA免疫小鼠的DTH反应。
3.AJSAF对新城疫活疫苗的免疫佐剂作用
触及自1日龄始按商业养殖的方式饲喂，每隔3日随机从鸡群中抽取5只鸡，收集血清，采用血凝抑制方法监测母源抗体水平。当平均母源抗体水平降至4以下时，将鸡群随机分组，各组每只鸡皆滴鼻免疫一羽份新城疫活疫苗并按组分别胸肌注射PBS、QuilA(0.16mg)和AJSAF(0.5mg、1mg和2mg)。首免后二周采用同样的方式进行二免。分别在首免后14d和二免后7d、14d、21d、28d、35d采血，分离血清，血凝抑制方法测定每只鸡的HI抗体。结果表明，AJSAF高剂量免疫鸡血清HI抗体效价显著高于疫苗对照组，说明AJSAF可显著、剂量依赖性地提高新城疫活疫苗免疫鸡血清HI抗体水平，具有免疫佐剂作用。