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【目的】
1.研究hsa-circ-0006361对裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤生长、裸鼠生存时间的影响。
2.探讨确定hsa-circ-0006361在上皮性卵巢癌发生发展中的作用可能机制。
【方法】
1.构建质粒。
构建hsa-circ-0006361过表达质粒与对应空载体circ-vector298质粒。
2.确立选用SKOV3、OVCAR3和A2780其中一种细胞株做实验。
通过qPCR测上皮性卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中转染hsa-circ-0006361和circ-vector298后hsa-circ-0006361的表达水平。
3.验证hsa-circ-0006361的亚细胞定位及hsa-circ-0006361是环状RNA。
3.1通过qPCR测上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞中hsa-circ-0006361的亚细胞定位。
3.2用SKOV3提总RNA后，实验组总RNA用RNase-R处理、对照组不用RNase-R处理，再通过琼脂糖凝胶电泳验证hsa-circ-0006361是环状RNA。
4.建立circ-vector298与过表达hsa-circ-0006361的稳转SKOV3细胞株。
4.1SKOV3细胞转染hsa-circ-0006361和circ-vector298后，用G418抗生素筛选，并用荧光显微镜检测转染效果，得到hsa-circ-0006361稳定表达的SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株。
4.2通过qPCR测SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株hsa-circ-0006361的表达水平。
5.建立裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤模型。
5.1购买与饲养裸鼠：制模前2周禁止对实验裸鼠进行任何刺激性操作。
5.2裸鼠接种实验：利用SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株分别建立裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤模型。其中观察裸鼠成瘤影响的组采用右侧腋窝表皮下接种方法；观察裸鼠生存时间的组采用腹腔注射方法。
6.观察裸鼠成瘤影响。
6.1每日观察裸鼠生活情况，每3日与测量裸鼠移植瘤瘤体的体积。
6.2于第30日处死裸鼠，拍照后分离移植瘤，对移植瘤进行拍照并测量瘤体的重量与体积，取移植瘤组织、肝肺组织以做后续实验。
6.3通过qPCR测上皮性卵巢癌移植瘤hsa-circ-0006361的表达水平。
6.4制作移植瘤组织、肝肺组织HE染色切片，显微镜观察移植瘤组织的形态结构、肝肺组织是否有上皮性卵巢癌细胞转移。
7.观察裸鼠生存时间。
每日观察裸鼠的生活情况及活跃度，记录存活时间。裸鼠死后解剖观察腹腔情况。
【结果】
1.构建hsa-circ-0006361与对应空载体circ-vector298质粒成功。
2.确立选用SKOV3细胞株做实验。
3.上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞中hsa-circ-0006361主要分布在细胞质。
4.hsa-circ-0006361的确为环状RNA，其亲本基因MARCH7为线性基因。
5.成功筛选出单克隆群D1号(hsa-circ-0006361组)、单克隆群H1号(circ-vector298组)。
6.单克隆群D1号、单克隆群H1号荧光显微镜检测转染效果良好。得到hsa-circ-0006361稳定表达的SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株做后续实验。
7.SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株与SKOV3/circ-vector298对照细胞株比较，SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株的确有过表达hsa-circ-0006361，差异有统计学意义(P＜0.05)。
8.hsa-circ-0006361组裸鼠移植瘤在12、15、18、21、24、27、30d肿瘤体积与circ-vector298组相比均明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。hsa-circ-0006361组裸鼠最终收获肿瘤的体积比注射了circ-vector298组大，肿瘤的重量比circ-vector298组重，差异有统计学意义(P＜0.001)。表明过表达hsa-circ-0006361可以明显增强SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长。
9.裸鼠所长的皮下移植瘤组织确实为上皮性卵巢癌组织，肝肺组织未见上皮性卵巢癌转移。
10.hsa-circ-0006361组裸鼠最终收获的移植瘤组织与circ-vector298组比较，其的确有过表达hsa-circ-0006361，差异有统计学意义(P＜0.001)。
11.hsa-circ-0006361组裸鼠移植瘤在第12天开始肿瘤体积增长明显比circ-vector298组明显，活跃度低于circ-vector298组裸鼠，生存时间明显少于circ-vector298组裸鼠，差异具有统计学差异(P＜0.01)。
【结论】
1.hsa-circ-0006361主要分布在细胞质，是环状RNA。
2.hsa-circ-0006361能够促进裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤的生长。
3.hsa-circ-0006361能够降低注射了上皮性卵巢癌细胞裸鼠的生存时间。
1.研究hsa-circ-0006361对裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤生长、裸鼠生存时间的影响。
2.探讨确定hsa-circ-0006361在上皮性卵巢癌发生发展中的作用可能机制。
【方法】
1.构建质粒。
构建hsa-circ-0006361过表达质粒与对应空载体circ-vector298质粒。
2.确立选用SKOV3、OVCAR3和A2780其中一种细胞株做实验。
通过qPCR测上皮性卵巢癌细胞株SKOV3、OVCAR3和A2780细胞中转染hsa-circ-0006361和circ-vector298后hsa-circ-0006361的表达水平。
3.验证hsa-circ-0006361的亚细胞定位及hsa-circ-0006361是环状RNA。
3.1通过qPCR测上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞中hsa-circ-0006361的亚细胞定位。
3.2用SKOV3提总RNA后，实验组总RNA用RNase-R处理、对照组不用RNase-R处理，再通过琼脂糖凝胶电泳验证hsa-circ-0006361是环状RNA。
4.建立circ-vector298与过表达hsa-circ-0006361的稳转SKOV3细胞株。
4.1SKOV3细胞转染hsa-circ-0006361和circ-vector298后，用G418抗生素筛选，并用荧光显微镜检测转染效果，得到hsa-circ-0006361稳定表达的SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株。
4.2通过qPCR测SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株hsa-circ-0006361的表达水平。
5.建立裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤模型。
5.1购买与饲养裸鼠：制模前2周禁止对实验裸鼠进行任何刺激性操作。
5.2裸鼠接种实验：利用SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株分别建立裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤模型。其中观察裸鼠成瘤影响的组采用右侧腋窝表皮下接种方法；观察裸鼠生存时间的组采用腹腔注射方法。
6.观察裸鼠成瘤影响。
6.1每日观察裸鼠生活情况，每3日与测量裸鼠移植瘤瘤体的体积。
6.2于第30日处死裸鼠，拍照后分离移植瘤，对移植瘤进行拍照并测量瘤体的重量与体积，取移植瘤组织、肝肺组织以做后续实验。
6.3通过qPCR测上皮性卵巢癌移植瘤hsa-circ-0006361的表达水平。
6.4制作移植瘤组织、肝肺组织HE染色切片，显微镜观察移植瘤组织的形态结构、肝肺组织是否有上皮性卵巢癌细胞转移。
7.观察裸鼠生存时间。
每日观察裸鼠的生活情况及活跃度，记录存活时间。裸鼠死后解剖观察腹腔情况。
【结果】
1.构建hsa-circ-0006361与对应空载体circ-vector298质粒成功。
2.确立选用SKOV3细胞株做实验。
3.上皮性卵巢癌细胞株SKOV3细胞中hsa-circ-0006361主要分布在细胞质。
4.hsa-circ-0006361的确为环状RNA，其亲本基因MARCH7为线性基因。
5.成功筛选出单克隆群D1号(hsa-circ-0006361组)、单克隆群H1号(circ-vector298组)。
6.单克隆群D1号、单克隆群H1号荧光显微镜检测转染效果良好。得到hsa-circ-0006361稳定表达的SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株和SKOV3/circ-vector298对照细胞株做后续实验。
7.SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株与SKOV3/circ-vector298对照细胞株比较，SKOV3/hsa-circ-0006361细胞株的确有过表达hsa-circ-0006361，差异有统计学意义(P＜0.05)。
8.hsa-circ-0006361组裸鼠移植瘤在12、15、18、21、24、27、30d肿瘤体积与circ-vector298组相比均明显增加，差异有统计学意义(P＜0.05)。hsa-circ-0006361组裸鼠最终收获肿瘤的体积比注射了circ-vector298组大，肿瘤的重量比circ-vector298组重，差异有统计学意义(P＜0.001)。表明过表达hsa-circ-0006361可以明显增强SKOV3细胞裸鼠移植瘤生长。
9.裸鼠所长的皮下移植瘤组织确实为上皮性卵巢癌组织，肝肺组织未见上皮性卵巢癌转移。
10.hsa-circ-0006361组裸鼠最终收获的移植瘤组织与circ-vector298组比较，其的确有过表达hsa-circ-0006361，差异有统计学意义(P＜0.001)。
11.hsa-circ-0006361组裸鼠移植瘤在第12天开始肿瘤体积增长明显比circ-vector298组明显，活跃度低于circ-vector298组裸鼠，生存时间明显少于circ-vector298组裸鼠，差异具有统计学差异(P＜0.01)。
【结论】
1.hsa-circ-0006361主要分布在细胞质，是环状RNA。
2.hsa-circ-0006361能够促进裸鼠上皮性卵巢癌移植瘤的生长。
3.hsa-circ-0006361能够降低注射了上皮性卵巢癌细胞裸鼠的生存时间。