花器官发育的ABC模型的扩展与修饰说明植物MADS-box基因家族在花发育进程中具有重要调节功能,经过基因重复、功能分化、互作网络精调而导致被子植物花形态的多样性。从单一模式植物转向多种植物联合分析,通过比较研究,将有助于阐释花部性状发育及其多样性的分子机制。草原龙胆(Eustoma grandiflorum)为龙胆科(Gentianceae)草原龙胆属(gentian)草本观赏植物,既具有单瓣花又有重瓣花,重瓣花的四轮花器官发育正常且雄蕊数目稳定,这与重瓣花多存在雄蕊瓣化的现象不同。为探讨草原龙胆花器官发育的分子机理,针对C/D类MADS-box基因开展了以下几方面的研究:1.C/D类MADS-box基因的克隆以草原龙胆不同发育阶段的混合花芽RNA为模板,用基因特异性引物,分别利用3’-RACE和RT-PCR技术,克隆了C功能基因EgPLE1和D功能基因EgMADS1。两类基因的C末端均具有保守的AG基序Ⅰ和AG基序Ⅱ,属于AG-like亚家族。Southern杂交结果显示,EgPLE基因在基因组中可能有多个拷贝,EgMADS1基因在基因组中可能有4个拷贝。2.D类MADS-box基因的表达分析用Northern杂交技术分析了EgMADS1基因的器官特异性表达情况。结果表明,该基因仅在雌蕊、胚珠表达。3.EgMADS1基因遗传转化载体的构建为深入开展EgMADS1基因的功能研究,用Gateway技术成功构建该基因的过量表达载体和RNAi载体,转化LBA4404菌株农杆菌,用叶盘法对烟草进行农杆菌介导的遗传转化。