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星形胶质细胞是中枢神经系统内分布最广泛、功能最复杂的胶质细胞,与神经元构成功能单位,在神经系统的多种生理活动和病理过程中起着极为重要的作用。根据Raff的星形胶质细胞“双谱系学说”,O-2A祖细胞(oligodendrocyte-type-2 astrocyte progenitor)/少突胶质细胞前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)是一种双向分化潜能的前体细胞,既能分化为少突胶质细胞(oligodendrocytes,OLs),又能分化为2型星形胶质细胞(type-2 astrocytes,T2As)。最近关于胶质细胞的系列研究均发现,体内特定微环境或体外诱导均可使GFAP阳性的星形胶质细胞呈现神经干细胞特性。本文拟通过恒温振荡法和差速贴壁法分离纯化得到OPCs,诱导分化为T2As,然后研究T2As在去分化及随后诱导分化过程中细胞生物学特性的变化。目的:体外研究O-2A谱系星形胶质细胞在去分化和诱导分化过程中的生物学特性改变及干细胞标记物的表达,进一步深入研究T2As的神经干细胞特性。方法:(1)取新生大鼠大脑皮质,纯化培养T1As(type-1 astrocytes,T1As),OPCs和T2As,观察T2As在含生长因子(EGF和b FGF)神经干细胞培养液中的细胞形态学变化,并分别进行T1As,OPCs和T2As相应的特异性标记物GFAP和A2B5免疫荧光检测。(2)应用免疫荧光技术检测SOX2和Mash1在神经干细胞样细胞(neural stem-like cells,NSLCs)中的表达,统计T2A的去分化率。(3)观察NSLCs在低血清条件培养基中的形态变化,应用Western blot检测GFAP、Vimentin、SOX2、Mash1和DCX在星形胶质细胞去分化和诱导分化过程中的表达变化;应用免疫细胞化学技术检测神经干细胞和神经元标记物在神经干细胞样细胞诱导分化细胞(neural stem-like cells differentiated cells,NSLDCs)中的表达。结果:(1)采用恒温振荡法和差速贴壁法分离纯化T1As、OPCs和T2As,获取的细胞纯度较高。T2As在含生长因子(EGF和bFGF)神经干细胞培养液中呈神经干样细胞,免疫细胞化学技术显示T1As呈GFAP阳性,A2B5阴性,OPCs呈A2B5阳性,GFAP阴性,T2As标记A2B5和GFAP均呈阳性。(2)统计T2A的去分化率为(92±2.6)%,NSLCs经SOX2和Mash1免疫荧光检测均呈阳性。(3)NSLCs在低血清条件培养基中呈神经元样形态,Western blot检测星形胶质细胞标记物GFAP在T2As去分化和诱导分化过程中呈现降低的趋势,表明细胞已经从胶质细胞类型转变为其他的细胞类型。Vimentin在T2As中少量表达,去分化之后表达量明显增高。为了进一步证明T2As去分化之后呈神经干样细胞,用公认的神经干细胞标记物SOX2和Mash1检测细胞,显示与T2As相比,NSLCs中这两种标记物明显增高。这些结果表明T2As已经从星形胶质细胞去分化为NSLCs。添加低血清条件培养基进行诱导再分化后,细胞中SOX2和Mash1表达下降。在星形胶质细胞去分化和诱导分化过程中,DCX的表达呈现增高的趋势,表明细胞开始从NSLCs向NSLDCs分化。免疫细胞化学技术检测神经干细胞和神经元标记物在NSLDCs中的表达呈阳性。结论:采用恒温振荡法和差速贴壁法获取的O-2A谱系细胞T2As纯度较高。T2As在含生长因子(EGF和bFGF)神经干细胞培养液中能去分化,呈神经干样细胞,统计T2As的去分化率为(92±2.6)%。NSLCs在含有低血清的神经元培养基中能进行诱导分化,诱导分化的NSLDCs中神经元标记物呈阳性。T2As的神经干细胞特性得到进一步显现。