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目的：培养高纯度兔骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)并诱导其向软骨细胞定向分化；探讨兔骨髓间充质干细胞复合透明质酸钠对兔关节软骨缺损的修复作用。方法：1.穿刺抽取兔骨髓,采用改良密度梯度离心法获取BM-MSCs,在含15%胎牛血清的低糖DMEM培养液中培养扩增,利用流式细胞仪在P3代时测定细胞表型以鉴定。2.取P2代细胞分为2组：诱导组,加入软骨诱导液；对照组,加入普通培养液。倒置显微镜下观察细胞生长状况,21天后进行阿尔辛蓝染色检测细胞外基质中糖胺多糖的分泌和表达。3.将18只家兔在全麻下制备兔膝关节全层软骨缺损后随机分为三组,实验组缺损处植入BM-MSCs/透明质酸钠复合物,对照组单纯植入透明质酸钠,空白组不做特殊处理,于术后6、12周处死动物,进行肉眼大体观察、组织学检测,并对相关指标进行改良Pineda法组织学评分,所得评分采用统计软件SPSS13·0进行统计学分析。结果：1.分离所得细胞具有典型成纤维样细胞形态,贴壁；细胞表型检测结果为：CD29阳性率90.6%,CD44阳性率99.1%,CD45阴性率96.5%。2.诱导组细胞呈磷片形或多角形聚集生长,阿尔辛蓝染色呈阳性；对照组细胞依旧呈典型的长梭状贴壁生长,阿尔辛蓝染色呈阴性。3.实验组软骨缺损处为软骨样组织修复,阿尔辛蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色呈阳性；对照组和空白组主要为纤维组织修复,内有少量软骨细胞,阿尔辛蓝染色及Ⅱ型胶原免疫组化染色呈弱阳性。实验组在各个时期与对照组、空白组的评分比较差异都具有统计学意义(P<0·05),示实验组修复效果较其他两组为优。结论：1.通过改良密度梯度离心法可获得纯度较高的MSCs,且方便、易行。2.骨髓间充质干细胞在体外经TGF-β3、胰岛素、丙酮酸钠、维生素C、地塞米松诱导后可向软骨方向诱导分化。3.骨髓间充质干细胞／透明质酸钠复合物有助于软骨缺损的修复。