[目的] 洛克沙肿(3-硝基-4-羟基苯胂酸,Rox),作为一种有机胂饲料添加剂,具有抗菌抗球虫、提高饲料报酬、促进动物生长的作用,在世界范围内被广泛使用。本课题组前期研究中发现洛克沙胂在体外具有促血管内皮细胞生长的作用,而洛克沙胂在促进血管生成及其作用机制方面的研究报道极少,本文借助体外大鼠内皮细胞培养、管形成模型和体内小鼠黑色素移植瘤模型,通过MTT试验、BrdU细胞增殖试验、划痕试验、管形成试验、免疫组化和WesternBlot方法,研究PLCyγ/PKC信号在洛克沙胂体内外促血管生长中作用。[方法]大鼠内皮细胞体外实验中,不同处理分组如下：PBS、0.1μMRox、1.0μM Rox、 10 μM Rox、10 ng/mL VEGF、40μM U73122、40 μM U73122+1.0μM Rox。运用MTT、BrdU、划痕试验、管形成试验检测细胞活力、增殖、细胞迁移和血管样结构形成能力。应用Western-blot技术检测PLCy/PKC信号蛋白的表达。在小鼠B16黑色素移植瘤试验中,不同处理如下：PBS、1 mg/kg Rox、5 mg/kg Rox,25 mg/kg Rox、10 mg/kg SU5416、10 mg/kg SU5416+5 mg/kg Roxo各处理组在B16细胞注射后7 d灌胃给予,持续7 d。测量小鼠体重、瘤体积及重量；对肿瘤组织进行HE染色及CD31免疫组化分析,Western Blot分析PLCγ/PKC信号蛋白的表达。[结果]MTT法检测内皮细胞处理24 h后的细胞活力,结果显示1.0 Mm Rox组与PBS对照组相比OD值显著升高(P<0.05),0.1μM Rox组和10μM Rox组无显著性差异。10 μM Rox+U73122组与1.0μM Rox组相比OD值极显著降低(P<0.01)。BrdU试验检测内皮细胞处理24h后细胞增殖能力,结果显示1.0μM Ro x组与PBS对照组相比,BrdU阳性细胞数显著(P<0.05)；01μM Rox组和10μM Rox组也增多,但差异不显著；1.0μM Rox+U73122组与10 μM Rox组极显著降低(P<0.01)。划痕试验结果显示1.0μM Rox组与PBS对照组相比,细胞迁移能力显著增强(P<0.05)；0.1μM Rox组和10μM Rox组与PBS对照组比较迁移能力虽增强,但无显著性差异；1.0μM Rox+U73122组与10μM Rox组比较迁移能力极显著降低(P<0.01)。管形成试验表明10μM Rox组与PBS对照组比较,管数显著增多(P<0.05)；0.1Rox组和10Rox组管数增多,但无显著性差异。10μRox+U73122组与10μM Rox组比较,管数极显著减少(P<0.01)。Western Blot分析表明,不同浓度Rox显著促进P LCγ、PKC蛋白磷酸化(P<0.05),1.0μM Rox组与PBS对照组比较差异极显著(P<0.01); 1.0μM Rox+U73122组与1.0μM Rox组比较,PLCγ、PKC蛋白磷酸化极显著减少(P<0.01)。小鼠B16移植瘤模型试验表明不同浓度Rox处理后,小鼠肿瘤的重量和体积均增加,5、25mg/kg Rox组差异显著(P<0.05);10 mg/kg SU5416+5 mg/kg Rox组与5 mg/kg Rox组比,肿瘤的重量和体积显著减少(P<0.01)。肿瘤组织HE染色及CD31免疫组化分析表明,不同浓度Rox处理后肿瘤组织中血管生长相对良好；10mg/kg SU5416+5mg/kg Rox组与5mg/kg Rox组比较,肿瘤组织中出现坏死区域,血管生长状态不佳。Western Blot检测结果表明：不同浓度的Rox处理后,肿瘤组织中PLCγ、PKC蛋白磷酸化增加,差异显著(P<0.05)；10 mg/kg SU5416+5 mg/kg Rox组与5mg/kg Rox组比较,PLCγ、PKC蛋白磷酸化减少,差异极显著(P<0.01)。[结论]洛克沙胂能够促进血管内皮细胞生长及血管形成,促进小鼠B16移植瘤及其血管的生长。PLCγ/PKC信号通路在洛克沙胂促血管生成中具有重要调节作用。