益气升提法治疗实验性自身免疫性重症肌无力大鼠免疫机制研究

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目的:探讨益气升提法治疗实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental Autoimmune Myasthenia Gravis,EAMG)大鼠免疫机制。方法:1.采用鼠源乙酰胆碱受体(acetylcholinergic receptor,AChR)α亚基97-116肽段(Rα97-116)免疫方法构建实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)模型。2.50只SPF级雌性Lewis大鼠,随机选择6只大鼠作为佐剂对照组,其余造模。评估确定模型成功36只,随机分为模型对照组、阳性药物对照组(强的松)、升陷汤组、益气升提组(黄芪、柴胡、升麻、桔梗)、益气组(黄芪),升提组(柴胡、升麻、桔梗)。灌胃一个月。3.大鼠每周称重,观察大鼠临床表现、体重、低频重复电刺激(ReptitiveNerve Stimulation,RNS)衰减率。4.用酶联免疫吸附实验(Enzyme-linkedImmunoSorbent Assay,ELISA),测定大鼠外周血血清因子IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-17及抗体AChR-Ab含量。5.用流式细胞术(FlowCytometry,FCM),测定大鼠外周血淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg 比例。结果:1.造模后,造模大鼠与佐剂对照组比较,体重下降,肌无力症状明显,血清AChR-Ab含量显著升高(P<0.01),RNS衰减率显著增大(P<0.01),且均超过10%,证明造模成功。2.经药物治疗后,与模型对照组比较,阳性药物对照组、升陷汤组、益气升提组大鼠临床症状好转,RNS衰减率均显著降低(P<0.01或P<0.05),外周血血清AChR-Ab、IFN-γ、IL-4、IL-17水平显著下降,TGF-β水平升高(P<0.01或P<0.05);外周血淋巴细胞 CD4+CD25+Foxp3+Treg 比例显著升高(P<0.05)。结论:益气升提法可以有效改善EAMG大鼠临床症状,其机制可能是降低外周血血清IFN-γ、IL-4、IL-17含量,升高TGF-β含量,提高外周血淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+Treg比例,综合调节淋巴细胞网络因子,增强机体免疫抑制,减少机体免疫应答,恢复免疫平衡,减少AchR-Ab产生,降低血清AchR-Ab含量。
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