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微生物主要以气溶胶的形式存在于空气中，气溶胶颗粒较小，容易造成空气污染。空气微生物不仅是室内空气的污染源，而且是影响室内工作人员健康的一个重要因素。本论文通过免培养方法研究了实验室空气细菌的组成和多样性，在此基础上建立了大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼氏不动杆菌这三种空气常见病原微生物的快速定量检测方法。采用微孔滤膜法采集实验室空气环境中的微生物，根据滤膜孔径、采样时间等因素设计空气样品采集方案，发现适宜的滤膜孔径为0.22μm，采样时间和气流速度对微生物的采集效率的影响不明显，但需根据气体流速选择适当的采样时间，以保证得到足够数量用于DNA提取的微生物；通过掺菌法比较3种DNA提取试剂盒和DNA快速提取液的提取效果，发现土壤基因组DNA快速提取试剂盒的提取效果较好，但对金黄色葡萄球菌DNA提取效率较低，加入溶葡球菌酶和改进操作后可满足空气样品宏基因组DNA提取；采用16S rDNA克隆文库法分析了空气样品细菌的多样性组成：包括芽孢杆菌属(Bacillus)(60.3%)、葡萄球菌属(Staphylococcus)(1.2%)、不动杆菌属(Acinetobacter)(19.4%)、副球菌属(Paracoccus)(14.9%)、肠杆菌属(Enterobacter)(0.7%)、棒状杆菌属(Corynebacterium)(0.7%)、贪铜菌属(Cupriavidus)(0.5%)、赛托氏菌属(Schlegelella)(0.5%)、鞘氨醇盒菌属(Sphingopyxis)(0.5%)、黄单胞菌属(Xanthomonadaceae)(0.5%)、微枝形杆菌属(Microvirga)(0.2%)、鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas)(0.2%)、非培养的假单胞菌目(uncultured Pseudomonadales)(0.2%)和非培养的红细菌目(unculturedRhodobacterales)(0.2%)。根据多样性分析结果，选择大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和鲍曼氏不动杆菌为空气中待测病原菌，大量调取这三种菌的不同基因的序列，利用BioEdit、primer premier5.0、DNAstar、DNAuser、Annbyb222等软件设计和筛选出这三种菌的特异性强、覆盖度高的引物用于荧光定量PCR检测，并用筛选得到的特异引物制作了三种空气常见病原菌的荧光定量PCR程序和定量曲线，建立了这三种空气病原菌的荧光定量PCR检测方法。