[背景]膀胱癌是最常见的泌尿生殖系恶性肿瘤之一,在我国发病率和死亡率呈逐年上升趋势。膀胱癌的发病机制十分复杂,许多蛋白的表达或功能异常及多种信号通路的改变都可能影响其发生、发展。膀胱癌通过CT/MRI预测阳性淋巴结方面存在局限,主要原因是无法定位小体积、微转移淋巴结,早期诊断技术缺乏特异性、灵敏性,且术后复发率高仍是该领域主要的问题。sTn抗原与肿瘤增殖、分化、转移等密切相关。研究发现sTn抗原具有促进肿瘤细胞的活动、浸润与免疫逃逸,故其与淋巴结的转移具有密切的关联。sTn差异性表达可能与P13K/Akt/mTOR通路及EMT相关。但GSK3 β、mTOR和sTn在膀胱癌癌组织、癌旁组织、淋巴结组织、正常组织、血液中的表达情况,且GSK3 β、mTOR和sTn之间的相关性及sTn与淋巴结转移之间的关系尚不清楚。[目的]研究sTn、GSK3β和mTOR在癌组织、癌旁组织、淋巴结组织、正常组织和血液中的表达情况1.各样本中sTn、GSK3 β和mTOR的表达是否存在相关性2.sTn、GSK3 β和mTOR在正常膀胱组织、NMIBC和MIBC有差异表达3.癌组织和淋巴组织sTn、GSK3 β和mTOR对是否出现淋巴结转移有差异表达4.通过血液中sTn、GSK3 β和mTOR基因差异表达情况实现膀胱癌淋巴结转移的早期筛查及术后检测[方法]1.(1)筛选确诊为NMIBC、MIBC者各4例(纳入标准:患者术前均未行化疗、放疗及免疫治疗等任何治疗),以及正常健康对照者1例(膀胱脉管瘤患者)。(2)筛选确诊为淋巴未转移患者6例,淋巴转移患者2例,以及正常健康对照者1例(膀胱脉管瘤患者)。2.收取癌组织、癌旁组织、淋巴结组织、正常组织、血液组织放入-80°冰箱保存。通过QPCR实验检测GSK3 β、mTOR、sTn在癌组织、癌旁组织、淋巴结组织、正常组织、血液中的基因表达情况。通过免疫组化在癌组织、癌旁组织、淋巴结组织、正常组织的表达情况[结果]1.Q-PCR检测结果(1)在淋巴组、血液组,GSK3 β和mTOR的基因表达成显著正比相关(p<0.01);在癌组,GSK3β和mTOR的基因表达无统计学意义(p>0.05);在癌旁组,GSK3β和mTOR的基因表达无统计学意义(p>0.05)。(2)将9个病例分成正常组(1号)、NMIBC组(2、3、4、5号)和MIBC组(6、7、8、9号),癌组织中GSK3 β和mTOR分别将以上三组两两对照比较。对于mTOR蛋白基因表达情况,NMIBC组较正常组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),MIBC组较NMIBC组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);对于GSK3β蛋白基因表达情况,NMIBC组较正常组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),MIBC组较NMIBC组高,差异具有显著统计学意义(P<0 01)。(3)将9个病例组分成正常组(1号)、淋巴未转移组(7、8号)和淋巴转移组(6、9号)。对于癌组织中mTOR蛋白基因表达情况,淋巴未转移组较正常组膀胱组织高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);对于癌组织中GSK3β蛋白基因表达情况,淋巴未转移组较正常组膀胱组织高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),淋巴转移组较淋巴未转移高,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。将9个病例组分成淋巴未转移组(7、8号)和淋巴转移组(6、9号)。对于淋巴组织中mTOR蛋白基因表达情况,淋巴转移组较淋巴未转移高,差异具有统计学意义(P<0.05)。对于淋巴组织中GSK3 β蛋白基因表达情况,淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。(4)将9个病例组分成正常组(1号)、淋巴未转移组(7、8号)和淋巴转移组(6、9号)。对于血液中mTOR蛋白基因表达情况,淋巴未转移组较正常组膀胱组织高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。对于血液中GSK3 β蛋白基因表达情况,淋巴未转移组较正常组血液高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。2.免疫组化检测结果(1)在淋巴组和癌组,sTn与GSK3β和mTOR成正比相关有显著统计学意义(p<0.01),而在癌旁组sTn与GSK3 β和mTOR无相关性无统计学意义(p>0.05)。(2)将9个病例分成正常组(1号)、NMIBC组(2、3、4、5号)和MIBC组(6、7、8、9号),癌组织sTn、GSK3 β和mTOR分别将以上三组两两对照比较。sTn蛋白在癌组织表达情况,NMIBC组较正常组高,差异具有统计学意义(P<0.05),MIBC组较NMIBC组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);mTOR蛋白在癌组织表达情况,NMIBC组较正常组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),MIBC组较NMIBC组高,差异具有统计学意义(P<0.05);GSK3β蛋白在癌组织表达情况,NMIBC组较正常组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),MIBC组较NMIBC组高,差异具有统计学意义(P<0.05)。(3)将9个病例组分成正常组(1号)、淋巴未转移组(7、8号)和淋巴转移组(6、9号)。sTn蛋白在癌组织表达情况,淋巴未转移组组较正常组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01),淋巴转移组组较淋巴未转移组组高,差异具有统计学意义(P<0.05);mTOR蛋白在癌组织表达情况,淋巴未转移组组较正常组高,差异具有统计学意义(P<0.05),淋巴转移组较淋巴转移组高,差异具有统计学意义(P<0.05);GSK3β蛋白在癌组织表达情况,淋巴未转移组较正常组高,差异具有统计学意义(P<0.05),淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。将9个病例组分成淋巴未转移组(7、8号)和淋巴转移组(6、9号)。sTn蛋白在淋巴组织表达情况,淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有显著统计学意义(P<0.01);mTOR蛋白在淋巴组织表达情况,淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有统计学意义(P<0.05)。GSK3β蛋白在淋巴组织表达情况,淋巴转移组较淋巴未转移组高,差异具有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.在淋巴和血液组织中,GSK3 β和mTOR的基因表达存在正比相关性,而癌和癌旁中,sTn、GSK3 β和mTOR的基因表达无相关性;在癌、淋巴和血液组织中,sTn、GSK3 β和mTOR蛋白表达存在正比相关性,而癌旁中,sTn、GSK3β和mTOR蛋白表达无相关性。可能sTn通过与Gal-3结合可激活P13K/Akt/mTOR信号通路,mTOR的表达升高,进一步上调GSK3 β的表达。2.GSK3 β和mTOR基因在正常组膀胱组织、NMIBC癌组织和MIBC癌组织的表达情况依次升高,sTn、GSK3 β和mTOR蛋白在正常组膀胱组织、NMIBC癌组织和MIBC癌组织的表达情况依次升高,提示检测sTn、GSK3 β和mTOR在癌组织的表达情况可能对膀胱癌患者分期有一定的帮助。3.癌组织和淋巴组织中GSK3 β和mTOR基因在淋巴未转移组较淋巴转移组的表达情况低,癌组织和淋巴组织中sTn、GSK3 β和mTOR蛋白在淋巴未转移组较淋巴转移组的表达情况低,提示癌组织和淋巴组织中sTn、GSK3 β和mTOR的表达情况可能对膀胱癌患者是否淋巴转移具有一定指导意义。4.血液中GSK3 β和mTOR基因在淋巴未转移组较淋巴转移组的表达低,结合在癌和淋巴、血液组织中sTn、GSK3 β和mTOR蛋白表达存在正比相关性,提示通过血液中sTn、GSK3 β和mTOR差异表达情况可能实现膀胱癌淋巴结转移的早期筛查与预后监测。