在全世界的幼小动物和儿童中，引起急性胃肠炎的主要病因是A型轮状病毒。在猪产业中，发病率和死亡率的重要来源是猪轮状病毒(PRV)感染，因此，为了预防感染需要先进的有效疫苗。对于预防PRV感染的发病率和死亡率，有效的RV疫苗非常重要，因为目前尚无特定的抗病毒治疗方法。粘膜免疫的诱导对于预防PRV感染很重要，并且与保护相关的免疫反应本质上是最重要的粘膜免疫。猪轮状病毒蛋白VP6是亚单位疫苗中最重要的候选蛋白，是一种高度免疫原性的糖蛋白。猪轮状病毒蛋白VP7适用于免疫保护和疫苗开发，因为它能够引起血清型特异性中和抗体，该抗体能中和病毒的感染力。
　　已经引入了一些具有健康有益特性的物种作为属于乳杆菌属的益生菌。植物乳杆菌NC8基因工程的益生菌作用和具有工程治疗功能的定植能力可能会结合在一起。车前草属乳酸菌是一种非致病性，革兰氏阳性和食品级的乳酸菌，已经作为异源抗原粘膜递送系统进行了研究。经工程改造的乳酸杆菌菌株口服给药后，可以迅速在胃肠道中定植，并在胃肠道中存活，在那里它们可以组成性地产生治疗性分子，从而减少了它们对消化酶，胃酸和胆汁的暴露。
　　树突状细胞通过指导先天性和调节适应性/获得性免疫而在靶向肽中发挥重要作用。聚-γ-谷氨酸合成酶A(pgsA)是枯草芽孢杆菌的聚谷氨酸PGA合成酶系统的组成蛋白，可以肯定地将某些酶系统锚定在细胞壁上。近来，PGA已用于证明植物乳杆菌表面上的外源蛋白质，其导致表面呈现的细菌成分。
　　在这项研究中，使用植物乳杆菌(L. plantarum)NC8作为宿主菌株(载体)，并使用两种PRV蛋白VP6和VP7作为抗原在胃肠道中传递PRV蛋白，以抵抗猪轮状病毒(PRV)。并被建造。我们的目标是评估中国猪轮状病毒分离株DN30209株的PRV蛋白(VP6和VP7)，该株对猪具有抗原性，可在小鼠中诱导抗体，可用于开发抗PRV腹泻疫苗的仔猪对先天性的影响小鼠模型的免疫力。具体研究内容和结果如下：
　　我们的第一个目标是评估重组PRVVP6在植物乳杆菌NC8菌株中诱导实验BALB/c小鼠中特异性粘膜和全身抗体产生的免疫原性。在此模型中，我们使用了7周龄(体重25-30g)的无轮状病毒抗体和无特定病原体(SPF)的成年雌性Balb/C小鼠，并随机分为三组(n=45)PBS，NC8-pSIP409-pgsA和NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep。三组中的所有小鼠经口接受109CFU/mL的剂量。给A组小鼠接种NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep。B组小鼠接种NC8-pSIP409-pgsA，C组小鼠接种PBS，通过SDS-PAGE，Westernblot和流式细胞仪确认表面表达。两种分析均提供了证据，表明VP6能有效地表达并在植物乳杆菌NC8的细胞表面上展示。此外，评估了用重组植物乳杆菌NC8免疫的小鼠的体液反应，并且所展示的重组VP6蛋白具有免疫原性。我们的研究结果表明重组NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep显着刺激了淋巴集结(PPs)中DC的分化(P＜0.001)，结果表明MLN和PP中B220+B细胞的表达水平结明显增加了肠系膜淋巴结(MLN)(P＜0.001)和PPs(P＜0.001)中B220+B细胞的产生，表明NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep促进了B细胞的扩增。通过ELISA测定的血清中IL-4和IFN-γ的水平在用NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep处理的小鼠中也增加了(P=0.001)。特异性IgG和粘膜抗体sIgA的表达水平明显高于空载体组(P<0.0001)，表明口服NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep可诱导粘膜免疫反应。此外;接种重组NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep并经PRV攻击的小鼠可诱导更长的针对轮状病毒攻击的保护。
　　我们的第二个目标是评估重组PRVVP7在植物乳杆菌NC8菌株中诱导实验BALB/c小鼠中特异性粘膜和全身抗体产生的免疫原性。用重组NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep接种小鼠，并用PRV攻击。我们的结果表明与先前的目标相同。
　　我们的第三个目标是评估重组PRVVP6-VP7在植物乳杆菌NC8菌株中诱导实验BALB/c小鼠中特异性粘膜和全身抗体产生的免疫原性。用重组NC8-pSIP409-pgsA-VP6-VP7-DCpep接种BALB/c小鼠，并用PRV攻击。研究了重组NC8-pSIP409-pgsA-VP6-VP7-DCpep对BALB/c小鼠脾，回肠和MLNMNC的差异作用。我们的结果表明与第一个目标相同。
　　这些结果表明，NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep，NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA-VP6-VP7-DCpep差分调制直流频率，表面表型。这些发现提高了我们对PRV相关保护作用和免疫力发展的了解。这些知识应有助于提高PRV疫苗的功效，并有助于设计新疫苗。
　　通过SDS-PAGE和Westernblot分析以及表面显示的表达证实了重组NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep，NC8-pSIP409-pgsA-VP6-VP7-DCpep的表达通过免疫荧光法证实了植物乳杆菌NC8上的抗性。用表达植物乳杆菌NC8的重组蛋白口服免疫的小鼠形成升高水平的血清免疫球蛋白G(IgG)和粘膜免疫球蛋白A(IgA)。用NC8-pSIP409-pgsA-VP6-VP7-DCpep免疫的小鼠的IgA滴度高于NC8-pSIP409-pgsA-VP6-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA-VP7-DCpep免疫的小鼠的滴度。刺激的抗体证实对PRV感染具有中和作用。
　　我们的结果表明，在植物乳杆菌NC8表达系统的情况下施用VP6和VP7是激发粘膜免疫力的有效方法，而DCpep提供了额外的刺激粘膜免疫力，这表明该方法可以修改用于猪。