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目的:观察离体预充时体外循环回路对瑞芬太尼浓度的影响,来探讨在体外循环回路是否对瑞芬太尼有吸附作用。
方法:在本次研究中,通过在预充液中加入镇痛药瑞芬太尼来观察离体时体外循环设备对瑞芬太尼是否有吸附作用。体外循环设备由西京90型中号鼓泡式氧合器、储血器、成人血管路(内径10mm),成人微栓滤器组成。试验组(B组n=6):在体外循环回路中预充1500ml液体(1000ml乳酸钠林格氏液,500ml贺斯)。4L·min<-1>转机,2L·min<-1>吹入氧气。温度维持在32~34℃,变温器维持。从氧合器加药口加入瑞芬太尼30μg,预测浓度为20ng·ml<-1>,在转机之前快速给入。在加药后第1,2,5,7,10,15,30,60分钟从氧合器动脉管处的三通抽取样品3ml放入一个10ml尖底硅硼酸玻璃离心管中。样品立即冷冻保存于-20℃冰上,直至分析。对照组(C组n=6):在玻璃容器内按上述比例加入晶体液和胶体液共计1500ml,加入瑞芬太尼30μg,使预测浓度为20ng·ml<-1>,温度维持在32~34℃,2L·min<-1>吹入氧气。在加药后第1,2,5,7,10,15,30,60分钟时取样品3ml放入一个10ml的尖底硅硼酸玻璃离心管中。样品于-20℃冰上保存。C组按照相同条件进行6次。
用气相色谱一质谱分析药物浓度。将lml样品漩涡混匀,加入内标芬太尼50μl,漩涡混匀15s,再分别加入2.5ml乙酸乙酯和2.5ml石油醚,漩涡10min,室温下平衡1min,取上层液转入一个干净的10ml玻璃离心管中,置于氮吹仪上,室温下氮气吹干。残留物定容在50μl乙酸乙酯中,漩涡5s,混匀,转入50μl玻璃小管中,自动进样器设定在自动进样1μl到程序升温器中分析。如不立即分析则需冷冻保存。对照组样品处理方法同上。色谱条件设定为,色谱柱进样前130℃保持平衡,在进样后保持此温度2.5分钟。接着柱温以50℃.min<-1>的速度由130℃升温到210℃,然后以6℃·min<-1>的速度由210℃升温到280℃,在每次温度增长后都没有持续时间。接着柱温以50℃·min<-1>由280℃跃升到320℃,并且在320℃保持2分钟。进样口被加热到250℃。转换线被加热到300℃。超纯氦气流速为1ml.min<-1>。标准曲线通过最小二乘法获得。配制瑞芬太尼浓度分别为0.5、50、200ng·ml<-1>的预充溶液样品,标本处理同上(n=5),分别与1天内进行5次提取进样,及5天内5次提取进样,测定日内及日间精密度。同样处理此3浓度的标本测定方法回收率。另配制一组同浓度溶解在乙酸乙酯里的样品直接进样,测定萃取回收率。
结果:
1、以瑞芬太尼与芬太尼的峰面积比(Y)为纵坐标,瑞芬太尼的浓度(X)为横坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程:Y=0.01696+0.00256X,r=0.998,(n=5)P<0.01。结果瑞芬太尼溶液浓度在0.1~250ng.ml<-1>范围内,线性关系良好。在本实验条件下,瑞芬太尼的最低检测限为:0.1ng.ml<-1>。在0.5、50.0、200.0ng·ml<-1>三种浓度时,萃取回收率分别为85.25±4.10%、89.79±3.98%、88.64±2.57%;精密度为4.55%、3.96%、2.94%。方法回收率分别为116.0±9.50%、108.00±6.10%、88.00±4.91%;精密度为8.76%、3.95%、3.87%。
日内精密度为8.69%、3.80%、3.79%;日间精密度为10.27%、9.85%、8.40%。本方法用芬太尼做内标,瑞芬太尼提取效果好,样品中杂质无干扰,样品中的内源性物质与瑞芬太尼及内标物能很好的分离,不干扰瑞芬太尼的测定。瑞芬太尼的保留时间为11.2min,芬太尼的保留时间为13.04min,二者波形均良好。
2、对照组(C组)中瑞芬太尼的浓度较为稳定,虽然较预测浓度有所下降,但无显著性差异(P>0.05)。实验组(B组)中,各时间点预充液中瑞芬太尼的浓度均低于预测瑞芬太尼浓度(20ng·ml<-1>)(P<0.05)。循环开始后,瑞芬太尼的浓度首先显著下降(P<0.05)。随转机时间增加,浓度开始回升接近至转机前水平,7分钟左右时浓度在整个实验过程中最高,然后浓度又缓慢下降,直至最低,保持较稳定。在实验最后阶段,B组的浓度为14.17±1.98ng.ml<-1>(P<0.05),有显著性改变;而C组的浓度为18.48±0.90ng·ml<-1>(P>0.05),无显著性意义。
结论:体外循环中的设备(氧合器、滤器等)可以吸附瑞芬太尼,它可以引起循环中瑞芬太尼浓度下降。因此在临床麻醉过程中,体外循环开始后应注意麻醉深度变化,及时调整用药量,尽量把病人的应激程度降到最低,保持情况平稳。