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目的：研究TLR4在各类肝细胞中的表达,探讨胰岛素对于TLR4的受体调控作用,发现肝脏糖代谢疾病的新的分子表征。方法：选用正常人肝细胞QSG-770、HL-7702、THLE-2和大鼠肝细胞BRL-3A,以及肝癌细胞LM3和HepG2细胞系作为研究对象。1、采用PCR和WB法检测TLR4在各种肝细胞中分布情况。2、采用siRNA/TLR4沉默肝脏正常细胞中的TLR4,建立稳定转染细胞株。3、采用建立好的稳定转染细胞株作为研究对象,胰岛素和LPS刺激作用后,用PCR和WB法,分别从mRNA和蛋白水平检测TLR4和能量代谢基因PFKFB3的表达情况。4、采用体外划痕愈合实验观察TLR4对肝细胞迁移能力的影响,transwell小室侵袭试验观察TLR4对肝细胞侵袭能力的影响。5、采用流式细胞术观察TLR4对肝细胞周期的影响,磷脂酰丝氨酸外翻法(Annexin V和PI双染法)检测TLR4对肝细胞凋亡的影响。采用JC-1检测试剂盒检测细胞线粒体跨膜电位。6、采用ATP含量检测试剂盒等,检测TLR4对肝细胞中ATP能量代谢指标变化的影响。7、采用PCR法检测TLR4在临床标本中表达情况结果：1、TLR4,这个炎性因子在正常肝细胞内的表达,高于肝脏肿瘤细胞。PFKFB3,这个能量代谢相关基因,在正常肝细胞内的分布低于肝脏肿瘤细胞2、siRNA TLR4作用后,肝细胞株内TLR4被沉默,同时,PFKFB3基因表达也会下调了。胰岛素刺激作用后,正常肝细胞内的TLR4表达上升,PFKFB3的表达也有增强。胰岛素作用于TLR4被沉默的肝细胞,TLR4表达稍有上升,PFKFB3的表达也略微有上升,但是仍然低于正常水平。3、TLR4被沉默的肝细胞,生长能力下降,胰岛素作用后有所提高。4、TLR4被沉默的肝细胞,G0期细胞数量上升,胰岛素作用后有所下降。5、TLR4被沉默的肝细胞,凋亡细胞数量上升,胰岛素作用后有所下降。6、TLR4被沉默的肝细胞,线粒体膜电位明显下降,胰岛素作用后有所上升。7、中国汉族人群未发现有杂合子或299Gly、399Ile纯合子的存在TLR4多态性结论：1、TLR4受体在正常肝细胞内的表达高于肝肿瘤细胞,而能量代谢相关基因PFKFB3,在肝肿瘤细胞内的表达高于正常肝细胞。2、TLR4参与肝细胞的糖代谢,有可能与调控PFKFB3基因相关,胰岛素是TLR4调控的刺激因子。3、TLR4参与糖代谢的机制可能与调控肝细胞生长、阻滞细胞周期,促进凋亡抑制能量合成等相关,胰岛素会缓解上述作用。