【摘 要】
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牛传染性鼻气管炎(Infections bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infections bovine rhinotracheitis virus,IBRV)引起。一般情况下 IBRV 容易发生反复感染,导致本病难以清除,严重危害养牛业。目前,疫苗免疫是防治IBR的主要措施,但灭活疫苗不能引起长期持续的体液免疫,弱毒疫苗有残余毒力和返强等危险。为
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牛传染性鼻气管炎(Infections bovine rhinotracheitis,IBR)是由牛传染性鼻气管炎病毒(Infections bovine rhinotracheitis virus,IBRV)引起。一般情况下 IBRV 容易发生反复感染,导致本病难以清除,严重危害养牛业。目前,疫苗免疫是防治IBR的主要措施,但灭活疫苗不能引起长期持续的体液免疫,弱毒疫苗有残余毒力和返强等危险。为了有效防控IBR,需要开发有效的诊断用抗体。本试验研究通过克隆IBRV gD基因,连接原核表达载体,转化大肠杆菌,经IPTG诱导表达,纯化及鉴定,获得IBRV-gD蛋白;然后以IBRV为抗原免疫成年健康双峰驼,采集全血,提取淋巴细胞总RNA,将其反转录后,扩增VHH基因片段并与载体pCANTAB5E连接,将其转化至大肠杆菌TG1感受态内,成功构建IBRV VHH抗体库。经过鉴定IBRV抗体库库容为7×107。经菌落鉴定,IBRV抗体库转化效率为75%。以gD蛋白作为筛选抗原,利用噬菌体展示技术,从IBRV VHH抗体库内进行筛选,并选取了相对结合能力较强的一株阳性克隆(IB68),构建表达载体,并对其诱导表达和纯化,从而获得高结合活性的IBRV gD特异性单域抗体。通过ELISA鉴定该单域抗体可以与IBRV或gD蛋白均产生抗原抗体结合反应,具有较高的抗原结合活性。Western-Blot检测证实本试验制备的单域抗体(IB68)的免疫学反应性。为以后的IBRV的快速诊断试剂的研发奠定了基础。
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