^为了探究促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）和糖皮质激素（GC）对体外染铝淋巴细胞免疫功能的影响。本实验选用健康Wistar大鼠（200～210g）的脾脏为淋巴细胞的提取对象，无菌条件下提取淋巴细胞后建立体外淋巴细胞培养体系。每项激素干预实验均分为五组，各组实验体系分别为：CRH实验：0mmol/L AlCl₃+0mol/L CRH（空白组，C-B），1/10IC₅0AlCl₃+0mol/L CRH（对照组，C-C），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-10mol/L CRH（低剂量组，C-L），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-9mol/L CRH（中剂量组，C-M），1/10IC-850AlCl₃+1×10mol/L CRH（高剂量组，C-H）。ACTH实验：0mmol/L AlCl₃+0mol/L ACTH（空白组，A-B），1/10IC₅0AlCl₃+0mol/L ACTH（对照组，A-C），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-13mol/L ACTH（低剂量组，A-L），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-12mol/L ACTH（中剂量组，A-M），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-11mol/L ACTH（高剂量组，A-H）。GC实验：0mmol/L AlCl₃+0mol/L Cort（空白组，G-B），1/10IC₅0AlCl₃+0mol/L Cort（对照组，G-C），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-8mol/L Cor（t低剂量组，G-L），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-7mol/LCort（中剂量组，G-M），1/10IC₅0AlCl₃+1×10^-6mol/L Cort（高剂量组，G-H）。用CCK-8法检测铝对淋巴细胞的半数抑制浓度（IC₅0）和T、B淋巴细胞增殖率，用流式细胞术检测T淋巴细胞亚群，放射免疫分析法检测IL-2和TNF-α分泌量，ELISA检测IgG分泌量和细胞内cAMP含量，实时定量RT-PCR（qRT-PCR）检测促肾上腺皮质激素释放激素受体1（CRHR1）、促肾上腺皮质激素受体（ACTHR）和糖皮质激素受体（GCR）mRNA表达，蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测GCR蛋白表达。实验结果如下：1. CRH干预实验：1). C-L组T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量高于C-C组（P＜0.05；P＜0.01）；C-M组T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量较C-C组变化不显著（P＞0.05）；C-H组T淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量低于C-C组（P＜0.05；P＜0.01）。表明低浓度CRH能缓解铝对体外培养大鼠淋巴细胞的免疫抑制状态；高浓度CRH能加重铝对体外培养大鼠淋巴细胞的免疫抑制状态。2). C-L组淋巴细胞cAMP含量低于C-C组（P＜0.05），CRHR1mRNA表达量变化不显著（P＞0.05）；C-M组cAMP含量较C-C组变化不显著（P＞0.05），CRHR1mRNA表达量升高（P＜0.01）；C-H组cAMP含量高于C-C组（P＜0.01），CRHR1mRNA表达量升高（P＜0.05）。说明CRH对体外染铝淋巴细胞免疫功能的“CRHR-cAMP”信号调节机制发生紊乱。2. ACTH干预实验：1). A-L组和A-M组T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量较A-C组变化不显著（P＞0.05）；A-H组T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量低于A-C组（P＜0.05；P＜0.01）。表明高浓度ACTH能加重铝对体外培养大鼠淋巴细胞的免疫抑制状态。2). A-L组和A-M组cAMP含量较A-C组变化不显著（P＞0.05），A-H组cAMP含量高于A-C组（P＜0.01）；各浓度组ACTHR mRNA表达量较A-C组均显著升高（P＜0.01），揭示ACTH对体外染铝淋巴细胞免疫功能的“ACTHR-cAMP”信号调节机制紊乱。3. GC干预实验：1). G-L组淋巴细胞T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量高于G-C组（P＜0.05；P＜0.01）；G-M组T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量较G-C组变化不显著（P＞0.05）；G-H组T、B淋巴细胞增殖，CD3⁺、CD4⁺T淋巴细胞表达率和CD4⁺/CD8⁺值，IL-2、TNF-α和IgG的分泌量低于G-C组（P＜0.05；P＜0.01）。表明低浓度GC能缓解铝对体外培养大鼠淋巴细胞的免疫抑制状态；高浓度GC能加重铝对体外培养大鼠淋巴细胞的免疫抑制状态。2). G-L组淋巴细胞cAMP含量低于G-C组（P＜0.05），GCR mRNA和蛋白表达量升高（P＜0.05）；G-M组cAMP含量、GCR mRNA和蛋白表达量较G-C组变化均不显著（P＞0.05）；G-H组cAMP含量高于G-C组（P＜0.01），GCR mRNA和蛋白表达量显著下降（P＜0.05）。提示淋巴细胞在一定范围内可通过调节GCR mRNA和蛋白表达进行自身免疫保护。