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本文研究了不同添加剂对促进变性牛碳酸脱水酶(CAB)的复性作用。考察了各种因素(添加剂浓度、pH值、温度和较低盐酸胍浓度下添加剂浓度)对复性收率的影响。并应用相关动力学模型,对酰胺化合物辅助CAB复性的动力学过程进行了深入分析,探讨了乙酰胺促进CAB复性的机理,试验了其它酰胺化合物对CAB复性的可能性。结果表明,乙酰胺、脲、硫脲、丙酮、β-CD、CTAB+β-CD 和Tween 40+β-CD均能有效促进变性CAB复性。β-CD、CTAB+β-CD 和Tween 40+β-CD随着浓度增大,促进作用增强;而乙酰胺、脲、硫脲均存在最佳浓度使变性CAB复性收率最大。乙酰胺、脲、硫脲、丙酮等添加剂不改变复性液的pH值,均可在较宽的pH范围(5.5~8.5)内促进CAB复性;添加剂的加入改变了CAB复性收率不随温度变化的规律,脲、乙酰胺在37℃、硫脲在45 ℃时复性收率最大。利用三级反应动力学方程拟和酰胺化合物辅助CAB复性的动力学过程。结果表明,模型计算值与实验数据能较好吻合。酰胺化合物与盐酸胍类似,复性速率常数 KN值大于没有添加剂时的自发复性,但随添加剂浓度增加而降低,聚集体生成速率常数KA值则在最佳添加剂浓度下出现最小值,从而使KN/KA值最大,复性收率r值最大。降低复性液中盐酸胍浓度,适当提高添加剂浓度,乙酰胺和脲仍可使变性CAB得到同样的复性效果;而硫脲必须在一定浓度的盐酸胍存在下,才能有效促进CAB复性。由于高浓度乙酰胺会引起蛋白质的不可逆变性,因此乙酰胺虽可用做辅助蛋白质复性的有效添加剂,但不能作为复性蛋白质的变性剂使用。为了进一步探明乙酰胺辅助变性CAB复性的作用机理,根据上述结果进一步对类似化合物如含有酰胺基团的甲酰胺、丙酰胺、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺促进变性CAB的复性作用进行了研究,发现它们均能有效地促进CAB复性,无论从其辅助CAB复性的动力学特性,还是随pH和温度的变化规律都与乙酰胺相似,因此认为酰胺基团对蛋白质复性的促进作用具有较大的贡献。