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唐菖蒲(Gladiolus hybridus)是鸢尾科唐菖蒲属多年生单子叶球根花卉,是世界著名的四大切花之一。唐菖蒲切花生产是我国花卉产业的重要组成部分。唐菖蒲切花生产中遇到的一个主要问题是病虫害繁多,尤其是真菌性病害发病十分严重。应用抗病品种是病害防治最直接有效的方法,但唐菖蒲抗病种质资源匮乏加之常规育种周期长,使得抗病品种远远不能满足生产上的需求。随着生物技术的迅猛发展,运用基因工程手段将外源抗病基因导入植物中,为唐菖蒲抗病育种带来了新的希望。本研究将抗真菌病基因(几丁质酶基因)通过农杆菌介导转化唐菖蒲。建立了唐菖蒲高频再生系统和遗传转化系统,经PCR 检测得到了PCR 阳性植株。为培育唐菖蒲抗真菌病新品种奠定了基础,为单子叶花卉植物遗传转化提供了理论依据。研究研究的主要内容和结果如下: 1.建立了唐菖蒲直接分化再生系统和愈伤组织再生系统:以子球茎为外植体,在MS+NAA0.2mg/L+6BA2.0mg/L+KT0.8mg/L 培养基上直接分化不定芽,在MS+ IBA0.5mg/L培养基上生根;以幼芽为外植体,在MS+2,4-D4.0 mg/L +6BA0.5 mg/L 培养基上诱导愈伤组织,在MS+NAA0.2mg/L+6BA2.0mg/L+KT0.8mg/L 培养基上诱导芽分化,在MS 培养基上生根。2.确定了抗生素选择压力:载体上含有NPTⅡ选择标记基因,使转化植株带有卡那霉素抗性,研究得到的卡那霉素选择压力为110mg/L。3.研究了预培养时间、侵染时间、共培养时间、共培养pH 值四个因素对遗传转化的影响:对于直接分化再生系统,最佳组合为:预培养0d+侵染15min+共培养2d+共培养pH 值5.6;对于愈伤组织再生系统,最佳组合为:预培养2d+侵染15min+共培养3d+共培养pH5.2。4.转化植株的PCR 检测:直接分化再生系统得到44 株抗性植株,其中1 株为PCR 阳性植株,阳性率为2.3%,转化率为0.07%。愈伤组织再生系统得到31 株抗性植株,其中3株为PCR 阳性植株,阳性率为9.7%,转化率为0.20%。