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目的:乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,在我国其发病率正在逐年上升,且发病年龄正在趋向年轻化,尽管目前的综合治疗方法显著改善了患者的生存期,但乳腺癌的复发和转移风险仍然很高。目前越来越多的证据显示,肿瘤组织中肿瘤干细胞的存在及数量是肿瘤复发和转移的根源,并且对判断病情进展和预后具有重要参考价值。但肿瘤干细胞缺乏特异的标志物对其检测,最近国外的研究发现,CD55可以作为乳腺癌干细胞的标志物,并可作为判断病情进展状况和预后的重要参考指标。本实验拟采用流式细胞术检测乳腺癌组织中乳腺癌干细胞(Mammary Cancer Stem Cells MCSC)的存在及比例,并分析其与临床病理因素:临床分期、病理类型、腋淋巴结转移情况及受体试验结果(C-erbB2、ER、PR),Ki67的关系,探讨CD55高表达(CD55hig)与乳腺癌预后的关系,为临床上对乳腺癌患者的病情估计、预后判断及指导乳腺癌的合理治疗提供一定理论依据。
方法:选取2008年2月至2009年1月在河北医科大学第四医院外一科诊治的乳腺癌患者45例,年龄30~72岁,中位年龄46岁。其中8例曾行过术前新辅助化疗,其余为首次就诊、未经过任何治疗的病人。其中根据腋淋巴结有无转移分为:无转移者16例,淋巴结转移1-3枚16例,淋巴结转移≥4枚13例;根据病理类型分为:浸润性导管癌33例,浸润性小叶癌7例,其他类型乳腺癌5例;根据临床分期分为:Ⅰ期11例,Ⅱ期26例,Ⅲ期8例;根据C-erbB2表达情况分为:阳性(+~+++)患者33例,阴性(-)患者12例;根据ER表达情况分为:阳性(+~+++)患者30例,阴性(-)患者15例;根据PR表达情况分为:阳性(+~++)患者26例,阴性(-)患者19例;根据Ki67表达情况分为:阳性(+~+++)患者32例,阴性(-)患者13例。
本试验采用CD55,CK19双抗对原发性乳腺癌单细胞悬液进行免疫荧光标记,以流式细胞学方法进行检测,取超出相对应的肿瘤5厘米的非癌乳腺组织作为免疫荧光标记时的阴性对照,检测中以乳腺癌细胞株所测的CD55hig的荧光密度值为界(本研究采用MDA-MB-231细胞株进行CD55检测,以此癌细胞表面受体大量结合CD55抗体的主峰处的荧光密度值为界值,超出此界值即为CD55hig),设门分析,获取门内CD55高表达(CD55hig)群细胞的比例。实验结果用Expo32 ADC软件进行分析,得到CD55高表达群细胞的比例。
结合患者的临床资料、病理类型、腋淋巴结转移状况及C-erbB2等因素进行相关分析。肿瘤的各项病理指标根据我院组织活检和手术标本的病理报告确定,患者的临床资料来自住院病历。
统计分析运用SPSS13.0统计软件分析实验数据。实验结果以x±S表示。两个样本均数的比较应用秩和检验(Wilcoxon符号秩检验),多组样本均数的差别比较应用秩和检验(Kruskal-Waillis H检验)。以α=0.05为检验水准。
结果:
1.本实验测得原发性乳腺癌肿瘤组织中CD55hig的细胞比例均数为0.21%±0.20。
2.CD55hig的细胞比例在腋淋巴结无转移组、1~3个腋淋巴结转移组及≥4个腋淋巴结转移组之间进行两两比较,差异均有统计学意义(P=0.000)。
3.本试验发现原发性乳腺癌肿瘤组织中C-erbB2(-)组的CD55hig的细胞比例为0.028±0.005,较C-erbB2(+~+++)组的CD55hig的细胞比例0.277±0.034,有明显的下降,差异有统计学意义(P=0.000)。
4.乳腺癌不同病理类型之间的CD55hig的细胞比例无统计学差异。
5.CD55hig的细胞比例在乳腺癌患者临床分期之间的差异无统计学意义。
6.CD55hig的细胞比例在乳腺癌组织中ER(-)、 ER(+~+++)组间,PR(-)、PR(+~+++)组间,Ki67(-)、Ki67(+~+++)组间比较,差异无统计学意义。
7.本研究发现,CD55hig的细胞比例在术前化疗组与未化疗组的比较中无统计学差异。
结论:
1.本研究发现乳腺癌肿瘤组织中代表乳腺癌类干细胞的CD55hig细胞的均数比例为0.21%±0.20。
2.原发性乳腺癌组织中类干细胞的比例在相对应的腋淋巴结无转移组,1~3个腋淋巴结转移组及≥4个腋淋巴结转移组之间进行两两比较,均有统计学差异,提示原发性乳腺癌组织中类干细胞的比例与乳腺癌患者病灶的转移和病情的进展有一定的相关性。
3.原发性乳腺癌组织中C-erbB2表达阳性组的乳腺癌类干细胞比例与C-erbB2(-)组比较有明显上升,有统计学差异,提示在侵袭性强的乳腺癌组织中乳腺癌类干细胞比例增高。
4.本研究未发现原发性乳腺癌组织中类干细胞比例在不同病理类型乳腺癌组织间有明确的相关性。
5.本研究未发现原发性乳腺癌组织中类干细胞比例与不同临床分期的乳腺癌病人有明确相关性。
6.本研究未发现原发性乳腺癌组织中类干细胞比例在乳腺癌组织中ER(-)、 ER(+~+++)组间,PR(-)、PR(+~+++)组间,Ki67(-)、Ki67(+~+++)组间的表达有明确的相关性。
7.本研究未发现原发性乳腺癌组织中类干细胞比例与术前是否化疗有明确相关性。
8.测定乳腺癌组织中CD55hig细胞群的比例对于了解肿瘤患者的病情进展及预后判断具有一定临床价值。