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目的:
以原发性乳腺癌患者作为研究对象,通过逆转录聚合酶连式反应(reversetranscription polymerase chain reaction RT-PCR)的方法,检测外周血细胞角蛋白(cytokeratin CK)CK-19/CK-20以及癌胚抗原CEA mRNA在原发性乳腺癌外周血的表达情况,观察经手术及化疗处理后,这些肿瘤标志物表达状况的改变,分析外周血循环肿瘤细胞标志物在乳腺癌发生和发展中与各临床病理因素之间的关系,初步探讨CK-19/CK-20以及CEAmRNA检测在乳腺癌诊治中的意义。
方法:
应用RT-PCR技术检测40例2007年9月至2008年6月在上海市杨浦区中心医院乳腺外科经手术证实为乳腺癌患者外周血CK-19/CK-20/CEA mRNA在术前/术后3天/术后14天(化疗前)/术后35天(化疗后)的表达,以健康志愿者(同期我院体检中心)及乳腺良性肿瘤(同期我科手术并经病理证实病人)各10例作为对照,通过卡方检验分析手术及化疗对乳腺癌患者循环肿瘤标志物的影响,同时将乳腺癌组和对照组进行病例-对照研究,通过Logistic多因素回归分析筛选出危险因素,从而找出影响乳腺癌外周血微转移的各临床病理因素。
结果:
40例2007年至2008年在上海市杨浦区中心医院乳腺外科经手术证实为乳腺癌患者,按全国乳腺癌诊治规范组织学分类标准,其中浸润性导管癌34例(85%);浸润性小叶癌4例(10%);髓样癌1例(2.5%);粘液癌1例(2.5%)。按国际抗癌联盟制定的分期标准,Ⅰ期8例(20%),Ⅱ期18例(45%),Ⅲ期12例(30%),Ⅳ期2例(5%)。腋淋巴结无转移者22例(55%),1~3个淋巴结转移者15例(37.5%),3个以上者3例(7.5%)。
CK-19/CK-20/CEA mRNA术前在对照组无一例阳性(0),而在乳腺癌组CK-19阳性者26例(65%)、CK-20阳性者20例(50%)、CEA阳性者16例(40%)。与对照组相比,进行卡方检验,手术前后CK-19组x2=22.94、CK-20组x2=15.02、CEA组x2=10.9,三组均P<0.01,手术前乳腺癌患者外周血肿瘤标志物存在高表达状态。
40例乳腺癌患者在手术后CK-19阳性者14例(35%)、CK-20阳性者10例(25%)、CEA阳性者8例(20%)。三组在手术前后进行卡方检验,x2分别为7.2(P=0.013)、5.33(P=0.037)及6.27(P=0.023),手术前肿瘤标志物的表达高于手术后。
40例乳腺癌患者在化疗前CK-19阳性者19例(47.5%)、CK-20阳性者15例(37.5%)、CEA阳性者10例(25%);化疗后CK-19阳性者6例(15%)、CK-20阳性者2例(5%)、CEA阳性者2例(5%)。三组在化疗前后进行卡方检验,x2分别为9.83(P=0.003)、12.62(P=0.001)及6.27(P=0.025),化疗前肿瘤标志物的表达高于化疗后。
将乳腺癌患者与对照组进行CK-19 mRNA表达水平与患者年龄、肿瘤类型、淋巴结转移、TNM分期及肿瘤最大径等因素进行Logistic相关性分析,结果显示:乳腺癌外周血微转移与淋巴结转移(P=0.0087)、TNM分期(P=0.0125)和大体类型(P=0.0451)有相关性。
结论:CK-19/CK-20/CEA在乳腺癌患者外周血中有高表达,其表达状况高低与肿瘤负荷相关。乳腺癌外周血微转移相关性因素为淋巴结转移、TNM分期和大体类型。对于临床分期较晚的浸润性导管癌、浸润性小叶癌患者,应定期检测生物标记物,警惕外周血微转移的存在。