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本论文研究了OPMA基因在枯草杆菌表达系统中的分泌表达及表达产物的酶学性质。分别将OPMA-N和OPMA-G基因克隆到表达载体pMA5中,构建了分泌表达载体pMA5-OPMA-N和pMA5-OPMA-G,分别转化枯草杆菌BS168,获得了分泌表达OPMA-N和OPMA-G的工程菌。为了进一步提高分泌酶的活力,分别对工程菌进行了发酵工艺优化。结果表明:BS168/pMA5-OPMA-N的最适发酵条件为:0.5%酵母粉,0.3%尿素,1% MgSO4,pH6.5,培养基的装液量为16%,发酵培养48h;BS168/pMA5-OPMA-G的最适发酵条件为:1%的淀粉,0.8%酵母提取物,1% NaCl, pH7.0,培养基的装液量为32%,发酵培养36h。在上述最适产酶条件下,OPMA-N和OPMA-G分泌水平分别达到发酵液中总蛋白的45%、58%,活力分别达到了4.57U/mg和4.65U/mg。对分泌表达的OPMA-N和OPMA-G进行了酶学性质表征。结果表明,两种酶均只能作用淀粉,产生多种低聚糖,包括麦芽糖,麦芽三糖,异麦芽三塘,异麦芽四糖,但不产生葡萄糖,然而,两者均不催化降解β-环糊精和普鲁兰。为了探索信号肽序列对目标酶分泌量的影响,在获得编码淀粉酶E(amyE)信号肽的DNA序列基础上,成功构建了重组有信号肽的表达载体pMA5-OPMA-SN和pMA5-OPMA-SG,并分别在枯草杆菌BS168中实现了高效分泌表达。与OPMA-N、OPMA-G的分泌水平相比,两者的分泌量均有提高,但不十分显著。比活力分析表明,OPMA-S与OPMA-N相比,有所提高;OPMA-SG与OPMA-G相比,有所降低但均不显著。底物、产物特异性分析表明,OPMA-SN、OPMA-SG与OPMA-N、OPMA-G具有相同的底物和产物特异性。以上结果表明,信号肽的引入只提高了OPMA-N,OPMA-G的分泌水平,但不影响酶的催化特性。