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目的:构建干细胞因子(SCF)可溶性受体与IgG-Fc段真核表达载体,使其在慢性粒细胞白血病细胞(K562)中表达,并探讨该重组质粒(pIRES2-EGFP-SCF-C-Kit-IgG)对K562细胞增殖和凋亡的影响,为干细胞因子在肿瘤靶向治疗中的作用的研究奠定基础。方法:通过循环多聚酶链反应(PCR)技术以人脐静脉内皮细胞和人基因组DNA为模板扩增出SCF可溶性受体与IgG-Fc段融合基因(sc-kit-IgG-Fc),以定向克隆的方法将其串联至真核表达载体pIRES2-EGFP中,获得重组表达载体pIRES2-EGFP-SCF-C-Kit-IgG;采用脂质体转染技术将重组质粒转染K562细胞,用G418筛选得到稳定表达重组质粒的细胞株;多聚酶链反应(PCR)、免疫印迹(western blot)鉴定融合蛋白的表达。采用CCK-8分析法检测实验组(重组质粒转染的K562细胞组)和对照组(空载体转染的K562细胞组和单独K562细胞悬浮培养组)的K562细胞的OD值,比较不同组在不同的时间点K562细胞的增殖情况。流式细胞仪检测三组K562细胞周期的变化及其凋亡情况。结果:DNA测序证明SCF可溶性受体与IgG-Fc段连接正确,经酶切反应及多聚酶链反应(PCR)证明基因正确克隆至pIRES2-EGFP的多克隆位点,稳定转染K562细胞后应用PCR与western blot可检测到融合蛋白的表达,其分子量大小和预期的基本一致。CCK-8检测细胞周期证明:转染了重组表达载体pIRES2-EGFP-SCF-C-Kit-IgG的K562细胞与对照组(空载体转染的K562细胞组和单独K562细胞悬浮培养组)相比细胞增殖明显(p<0.01),而两对照组之间增殖无显著差异(P>0.05)。流式细胞仪检测细胞周期及凋亡发现,实验组与对照组相比S期显著升高(P<0.01),细胞凋亡率实验组明显低于对照组(p<0.01)。结论:⑴通过循环PCR技术和脂质体转染技术,成功构建了pIRES2-EGFP-SCF-C-Kit-IgG真核表达载体,并在K562细胞中表达有活性的SCF-C-Kit- IgG融合蛋白。⑵稳定转染了pIRES2-EGFP -SCF-C-Kit- IgG基因的K562细胞的增殖加快,而凋亡受到了抑制。(3)为SCF及其受体C-Kit的研究提供了细胞模型。