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目的:探讨胞质巨噬细胞集落刺激因子M-CSF对人乳腺癌MCF-7细胞凋亡抗性的影响及机制。方法:胞质稳定转染M-CSF的MCF-7细胞系由实验室构建。用含10%NBCS(新生牛血清)的1640培养基分别培养MCF-7-M细胞(胞质稳定转染M-CSF的MCF-7细胞),MCF-7-C细胞(稳定转染空载体的MCF-7细胞),亲本MCF-7细胞。用Western blot观察胞质M-CSF对MCF-7细胞Nrf2和HO-1表达的影响。PI3K抑制剂LY294002和Akt抑制剂SH6预处理细胞分析PI3K和Akt是否介导胞质M-CSF诱导MCF-7细胞Nrf2和HO-1的表达,荧光染色分析Nrf2的亚细胞定位。用siRNA技术分析HO-1是否介导胞质M-CSF诱导MCF-7细胞的凋亡抗性。Hoechast33342染色和流式细胞术检测MCF-7细胞的凋亡。结果:与MCF-7细胞和MCF-7-C细胞比较,MCF-7-M细胞HO-1,T-Nrf2和N-Nrf2蛋白的表达明显增高(p<0.05),C-Nrf2减少(p<0.05),MCF-7细胞与MCF-7-C细胞的HO-1和Nrf2表达无差异(p>0.05)。红色荧光(标记Nrf2)聚集于MCF-7-M细胞核内,胞质的红色荧光较弱,在MCF-7细胞和MCF-7-C细胞中弥散分布整个细胞。PI3K抑制剂LY294002和Akt抑制剂SH6预处理后,MCF-7-M细胞HO-1,T-Nrf2和N-Nrf2蛋白的表达明显减少(p<0.05),C-Nrf2增多(p<0.05),红色荧光在MCF-7-M细胞呈现弥散性分布,核内红色荧光明显减弱。流式细胞术结果显示:未用ADM孵育的MCF-7-M细胞凋亡率为7.14%,ADM孵育的MCF-7-M细胞凋亡率为18.77%,HO-1-siNC+ADM孵育的MCF-7-M细胞凋亡率为19.96%,HO-1-siRNA+ADM孵育的MCF-7-M细胞凋亡率为24.27%,HO-1-siRNA+ADM孵育的MCF-7-M细胞凋亡率显著高于HO-1-siNC+ADM或ADM孵育的MCF-7-M细胞(p<0.01)。用ADM孵育后,MCF-7-M细胞、MCF-7细胞和MCF-7-C细胞的凋亡率分别为18.77%、27.2%和25.7%,MCF-7-M细胞的凋亡率低于MCF-7细胞和MCF-7-C细胞(p<0.01,图10),用ADM+LY294002,ADM+SH-6,ADM+DMSO分别孵育后,MCF-7-M细胞的凋亡率分别为27.33%、27.97%和19.17%,LY294002+ADM或SH-6+ADM预孵育的MCF-7-M细胞凋亡率显著高于DMSO预孵育的MCF-7-M细胞(p<0.01)。结论:1.胞质M-CSF诱导MCF-7细胞HO-1和Nrf2的表达及Nrf2核转位。2.胞质M-CSF诱导MCF-7细胞HO-1和Nrf2的表达及Nrf2核转位需要PI3K和Akt的活化。3.PI3K/Akt/Nrf2/HO-1信号通路参与胞质M-CSF诱导MCF-7细胞的凋亡抗性。