【摘 要】
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背景与目的角膜碱烧伤是一种临床常见的眼外伤。碱烧伤后,角膜组织发生炎性水肿,严重者可出现角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV)。由于CRNV的长入,其出血渗出
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背景与目的角膜碱烧伤是一种临床常见的眼外伤。碱烧伤后,角膜组织发生炎性水肿,严重者可出现角膜新生血管(corneal neovascularization, CRNV)。由于CRNV的长入,其出血渗出和继发纤维化都将影响角膜透明性并最终导致失明。角膜的新生血管会严重影响角膜移植的成功率,同时碱烧伤诱导的角膜新生血管模型是研究新生血管的较好模型。多项研究均发现一氧化氮(nitric oxide, NO)与新生血管发生关系密切。NO由一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)催化生成。在炎性环境中,诱导型一氧化氮合酶(inducible NOS, iNOS)是NO的主要提供者。然而该酶在新生血管形成中的作用目前尚存争议。本课题从建立小鼠碱烧伤CRNV模型着手,观察NO(NOS)和iNOS被抑制后对碱烧伤CRNV的影响,利用免疫荧光、RT-PCR探讨NO(NOS)、iNOS在碱烧伤CRNV形成中的作用与机制。材料与方法1. 40只BALB/c小鼠制作左眼碱烧伤诱导CRNV模型。将其随机分为对照组及L-NAME干预组,每组各20只小鼠。造模前1 w,实验组予含NOS抑制剂—L-NAME饮水,对照组正常饮水。1 w后行角膜碱烧伤诱导CRNV,并继续饮水至造模后第14 d。裂隙灯显微镜下观察碱烧伤后第1 d、3 d、7 d、14 d各组角膜的炎症反应、角膜穿孔及新生血管形成情况。于伤后第2 d、4 d每组随机取5只小鼠,RT-PCR法检测角膜组织中NOS的表达情况。并于伤后第14 d,免疫荧光标记两组剩余小鼠角膜中新生血管并对其面积进行比较。2. 40只BALB/c小鼠碱烧伤后将其随机分为对照组及AG干预组,每组20只小鼠,自碱烧伤后分别给予含有iNOS抑制剂—AG的0.2%透明质酸钠(sodium hyaluronate, HA)或0.2%HA点眼,每日3次。裂隙灯显微镜下观察碱烧伤后第1d、3 d、7 d、14 d各组角膜的炎症反应、角膜穿孔及新生血管形成情况。于伤后第2 d、4 d每组随机取5只小鼠,RT-PCR法检测角膜组织中iNOS、VEGF的表达情况。并于伤后第14 d,免疫荧光标记两组剩余小鼠角膜组织中的新生血管并对其面积进行比较。结果1.碱烧伤后2 d、4 d,L-NAME干预组小鼠角膜组织中NOS基因表达较对照组明显降低(P<0.05)。伤后14 d,L-NAME干预组CRNV面积较对照组显著减少(P<0.05)。2.碱烧伤后2 d、4 d,AG干预组小鼠角膜组织中iNOS基因表达较对照组明显降低(P<0.05),而VEGF的基因表达明显增强(P<0.05)。伤后第14 d,AG干预组CRNV面积与对照组之间无明显差异(P>0.05)。结论1. NO(NOS)在碱烧伤诱导小鼠CRNV模型中起促进新生血管发生发展的作用;2. iNOS在碱烧伤诱导小鼠CRNV模型中对新生血管发生发展无促进作用。
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