一、研究背景： 脑缺血后电针治疗对缺血性脑损伤具有保护作用，但是电针治疗保护作用的具体机制目前还不清楚。脑缺血缺氧时，细胞能量代谢障碍，膜电位下降，当下降至电压依赖性钠通道开放点时，Na+内流，膜去极化；激活电压依赖性Ca2+通道，Ca2+内流增加，Na+/Ca2+交换增加，引起Ca2+超载；谷氨酸的再摄取减少，释放增加，产生兴奋性氨基酸毒性效应；CL—及H2O被动流入，导致神经细胞水肿和其他急性损伤。因此Na+内流是缺血性脑损害的始动因素之一。 1.Na(v)1.1在缺血损伤或修复中可能起重要作用 目前在哺乳动物体内发现的钠通道有10种[1]，在脑组织高表达的钠通道亚型有Na(v)1.1，Na(v)1.2和Na(v)1.6三种[2]。动物实验[3]发现缺血后只有Na(v)1.1表达下调最明显；钠通道阻滞剂可明显逆转Na(v)1.1表达的下凋，使脑梗死体积缩小[4]。因此，缺血损伤可能会导致Na+通道选择性的耗损，Na(v)1.1在缺血损伤或修复中可能起重要作用[3-5]。 2.Na(v)1.6介导持续Na+内流，参与脑缺血后脑损伤？ Na(v)1.6在中枢神经系统和周围神经系统分布广泛，在神经元分布独特[6]，在海马CA区以及齿状回的分子层和颗粒层有明显的免疫反应[7]。Na(v)1.6在很多组织产生持续钠电流或介导、参与持续钠电流的产生[8-10]。离体和载体实验证实，缺血缺氧可引起海马CA1区神经元中持续钠电流增加[11]，钠通道阻滞剂可以抑制持续性钠电流的增强[12，13]。缺血缺氧后海马CA1区神经元中持续钠电流由Na(v)1.6介导？Na(v)1.6参与脑缺血后脑损伤？ 3.电针治疗对钠通道的表达可能有调控作用 脉冲电流刺激背根神经节神经元的研究发现[14]：①电流刺激不影响神经元的成活或者分布情况。②电流刺激后分布于背根神经节神经元的某些钠通道亚型(Na(v)1.8和Na(v)1.9)表达显著下调，与非刺激对照组相比下调程度具有统计学意义。提示电流刺激可能调控钠通道的表达。 钠通道参与神经性痛、炎症性痛的产生[15，16]。电针治疗可以缓解三叉神经痛、坐骨神经痛等神经原性疼痛[17,18]、炎症性疼痛及冷诱发的持续性疼痛[19]。推测电针治疗的镇痛作用可能是通过调控钠通道的表达实现的。 4.电针治疗对缺血性脑损伤具有保护作用 脑缺血后给予电针治疗，对缺血性脑损伤具有保护作用：电针治疗可减轻缺血后Ca2+超载[20-23]；维护细胞膜上Na+—K+—ATP酶的活性[24]；防止兴奋性氨基酸的过量堆积[25-27]，抑制自由基产生及随后连锁反应的发生[22，28]，增加脑血流，缩小脑梗死体积，减轻神经功能缺损[29，30]。 电针治疗对缺血脑组织具有保护作用，但其作用机制目前还不清楚。研究认为，Na(v)1.1在缺血损伤和修复中起重要作用[3，31]。Na(v)1.6可能参与介导缺氧后持续钠电流进入细胞[11]。Na(v)1.6也参与缺血后脑损伤？脑缺血后电针治疗是否可以调控Na(v)1.1或/和Na(v)1.6的表达而发挥脑保护作用？因此，本实验通过对大鼠的脑缺血模型进行电针治疗比，观察缺血脑组织Na(v)1.1和Na(v)1.6表达的变化及电针治疗对他们的影响，探讨电针治疗对缺血性脑损伤具有保护作用的可能机制。 二、研究目的： 1通过大鼠的脑缺血模型，观察Na(v)1.1和Na(v)1.6在缺血脑组织中的表达变化； 2对脑缺血的大鼠进行电针治疗，观察电针治疗后缺血脑组织中Na(v)1.1和Na(v)1.6表达变化，探讨电针治疗作用的可能机制。 三、研究方法： 选用健康成年SD大鼠，线栓法制作永久性右侧大脑中动脉闭塞的脑缺血模型，从成功复制的大鼠脑缺血模型中根据随机原则选取45只为大脑中动脉闭塞组，45只为真穴位电针治疗组，45只为假穴位电针治疗组，45只为钠通道阻滞剂组，另选取10只作为假手术对照组。观察点为缺血后6h，1d，2d，3d，7d。在各时间点分别进行神经功能学评分，HE染色观察病理变化，TTC染色观察梗死体积，免疫组化、Western blot、real—time PCR方法观察大脑皮层、纹状体区Na(v)1.1和Na(v)1.6的表达。各组结果以x±s表示，全部数据均采用SPSS16.0统计软件分析，多组数据的显著性比较用随机区组设计资料的方差分析；样本均数的两两比较用Dunnett(f)检验，P<0.05表示差异具有统计学意义。 四、结果： 1.Na(v)1.1在缺血后表达明显比假手术对照组上调，缺血1d稍下调，缺血2-7d表达再次上调，变化规律与文献[3]报道的结果一致；相同时间点，真穴位电针治疗组和Riluzole组与大脑中动脉闭塞组相比神经功能学评分减少，梗死体积缩小，Na(v)1.1表达下调显著，这些差异有统计学意义；真穴位电针组与Riluzole组相比，差异没有统计学意义。 2.缺血组织中Na(v)1.6表达比假手术对照组上调；Na(v)1.6在缺血后6h-1d表达上调，缺血2-7d表达下调。相同时间点，真穴位电针组和Riluzole组与大脑中动脉闭塞组相比神经功能学评分减少，梗死体积缩小，Na(v)1.6表达变化程度显著，差异有统计学意义；真穴位电针组与Riluzole组相比，差异没有统计学意义。 3.假穴位电针治疗组与大脑中动脉闭塞组相比，缺血后神经功能学评分降低、梗死体积缩小、Na(v)1.1和Na(v)1.6表达下调，但差异没有统计学意义；与真穴位电针治疗组和Riluzole组相比，差异有统计学意义。 五、结论： 1脑缺血后电针治疗对Na(v)1.1和Na(v)1.6表达具有调控作用：电针治疗在缺血后下调Na(v)1.1和Na(v)1.6，使Na+内流减少，缩小梗死体积，减轻缺血损伤，促进神经功能恢复。 2脑缺血后电针治疗可以起到类似Riluzole的作用，对缺血脑损伤具有保护作用，电针治疗的脑保护作用可能通过调控Na(v)1.1和Na(v)1.6表达实现的。 3假穴位治疗也可以对缺血后脑损伤起到一定的保护作用，但与真穴位组相比，这种脑保护作用较弱，电针治疗可能是通过穴位传播发挥作用。