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目的:探讨Ras信号传导通路在人类免疫缺陷病毒-1型反式转录激活因子(HIV-1 transactivator of transcription,HIV-1 Tat)诱导血脑屏障(blood–brain barrier,BBB)中紧密连接蛋白带状闭合蛋白-1(Zonula Occludens-1,ZO-1)及脑啡肽酶(neprilysin,NEP)破坏中的作用。方法:培养人脑微血管内皮细胞(human cerebral microvascular endothelium cells,HBEC-5i),以不同浓度HIV-1 Tat、Ras信号传导通路抑制剂法尼基硫代水杨酸(farnesylthiosalicylic acid,FTS)分别刺激细胞24h,并设立对照组,用四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测其对细胞活力的影响。分别以HIV-1 Tat、FTS及FTS预处理细胞3h后再加入HIV-1 Tat共同作用24h后,以蛋白免疫印迹法(western blot,WB)及实时反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测HIV-1 Tat诱导的紧密连接蛋白ZO-1及NEP(脑内降解β淀粉样蛋白amyloid-beta,Aβ的限速酶)的蛋白和mRNA表达的变化;分别以免疫荧光法(immunofluorescence,IF)检测HIV-1 Tat诱导的ZO-1及NEP免疫反应性的变化,以二氯二氢荧光素-乙酰乙酸酯(2′,7′-dichlorodihy-drofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光探针法检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量。同时,利用荧光标记的Aβ蛋白(Aβ(1-40)Hilyte)检测经过治疗后的细胞中外源性Aβ的沉积。结果:HIV-1 Tat、FTS浓度分别在1μg/mL和20μmol/L以下时对HBEC-5i活力无明显影响(P>0.05);HIV-1 Tat诱导组的ZO-1及NEP蛋白(P<0.01,P<0.05)与mRNA(P<0.01,P<0.01)表达水平显著下调,蛋白免疫反应性降低,细胞内活性氧含量(P<0.001)及Aβ蛋白沉积均增加。FTS预处理细胞3h可显著上调HIV-1 Tat诱导的ZO-1与NEP蛋白(P<0.01,P<0.05)及mRNA(P<0.01,P<0.01)的表达水平,增强ZO-1及NEP蛋白免疫反应性,降低细胞内活性氧含量及Aβ蛋白的沉积。结论:HIV-1 Tat可促进紧密连接蛋白ZO-1蛋白和mRNA下调而导致血脑屏障破坏,同时诱导脑内脑啡肽酶NEP蛋白和mRNA下调,促进细胞内活性氧的生成,可能导致Aβ在脑内沉积增加。阻断Ras信号传导通路可抑制HIV-1 Tat诱导的ZO-1和NEP破坏,减少ROS的产生,可能减少Aβ在脑内的沉积。