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脑缺血、脑外伤、脑肿瘤是多发的中枢神经疾病，也是常见的致死致残原因，对脑缺血、脑外伤、脑肿瘤等损伤／抗损伤机制的研究，对探索其防治机制，有重大的意义。 半胱氨酰白三烯（cysteinyl leukotrienes，CysLTs，包括LTC4，LTD4，LTE4）是花生四烯酸5-脂氧酶的代谢产物，最初被称为慢反应物质（slow reactive substance，SRS），CysLTs是很强的炎症介质，可以收缩支气管、增加气道反应性、收缩血管、降低血流量；引起外伤后的组织水肿及呼吸、循环功能障碍。中枢神经系统可以合成CysLTs，在脑外伤、脑肿瘤、脑缺血等病理状态下，CysLTs含量往往增加。研究发现CysLTs可以增加血脑屏障的通透性、导致脑水肿；抑制CysLTs的合成，可以减轻损伤后组织水肿、血管通透性增高。 在二十世纪八十年代，人们发现肺组织存在有两种CysLTs受体，即半胱氨酰白三烯受体1（CysLT1）和半胱氨酰白三烯受体2（CysLT2），直到上世纪末，这两种受体相继被克隆。它们均为经典的G蛋白偶联7次跨膜受体，与Gq蛋白偶联，激活后可以使细胞内钙增加。随后，很多CysLTs受体拮抗剂相继被开发，如zafirlukast、montelukast、tomelukast、pobilukast、pranlukast（ONO-1078）和MK 571，它们均能拮抗CysLTs引起的人支气管收缩，目前已有许多拮抗剂在临床用于支气管哮喘的治疗。CysLT1受体与CysLT2受体的分类，是依据受体能否被上述拮抗浙江大学博士论文剂所拮抗:能被拮抗的是CysLTI受体，不能被拮抗的则是CysLT:受体。因此，上述拮抗剂均为CysLTI受体拮抗剂，目前为止只有BayU9773是唯一能获得的一个CysLTZ部分拮抗剂。Northem Blot试验发现，CysLT;主要存在于脾和外周血白细胞，在脑内、肺、结肠、心脏、胰、前列腺、肾脏、肝脏等也有少量表达，但在脑内的具体表达部位仍不清楚。 ONO一1 078{pranlukast，4一氧一8一[对一（4一苯丁氧基）苯甲酞氨基]一2一(5一四哇基}4H一1一苯并毗喃半水合物}是cysLT，的强效拮抗剂，已作为抗炎症和抗哮喘药物用于临床，它能抑制LTC4、LTD4、抗原及其它一些刺激引起的豚鼠和大鼠气道、心脏、皮肤鼻粘膜等的血浆渗出;在中枢，ONO一1078能抑制蛛网膜下腔出血引起的犬脑血管痉挛，但ONO一1 078等白三烯受体拮抗剂能否保护脑缺血损伤仍不清楚。 因此完善脑缺血的评价方法，研究cysLTI在中枢的表达，研究ONo一1 078是否有脑缺血保护作用，这对探讨CysLTs在中枢的作用和地位，了解脑缺血的损伤及抗损伤机制，寻找抗脑缺血的药物有重要意义。1、大鼠局灶性脑缺血模型的定量分析 采用大脑中动脉阻塞（MCAO）诱导大鼠局灶性脑缺血模型，常用来观察药物对脑缺血损伤/抗损伤的机制，用计算机辅助技术定量分析脑损伤变化可以使观察更加客观和精确，便于定量观察药物保护作用。本实验以不同MCAO时间诱导脑缺血并再灌注24h后，观察神经功能缺失症状，并以计算机图像分析技术测定脑梗死体积、脑半球面积、皮层及纹状体神经元密度及白蛋白渗出;在缺血前后腹腔注射地塞米松0.lm眺g或尼莫地平0.4m叭g，观察药物的保护作用。结果发现缺血30 min和再灌注24h可发生神经功能缺失症状，出现稳定的梗死灶、缺血侧脑半球面积增加n.4%、神经元密度减少362%、白蛋白渗出明显增加。地塞米松和尼莫地平可改善神经功能缺失症状，显著减小梗死体积，抑制缺血侧脑半球面积增加、神经元死亡和白蛋白渗出。本实验显示，缺血30 min和再灌注24h是诱导局灶性脑缺血的合适条件，计算机辅助技术客观定量综合评价脑缺血损伤及药物作用是可行的方法。浙江大学博士论文2.CysLT:拮抗剂ONo一1078对大鼠及小鼠局灶性脑缺血的保护作用 CysLTs是强的炎症介质，在脑缺血后其合成和释放明显增加，oNo一1 078是CysLT;特异性拮抗剂。为了验证ONO一1 078是否具有抗脑缺血作用，本实验以大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）30 min，再灌注24h诱导局灶性脑缺血急性损伤模型，oNo一r 078（0.003一1.0 mg/kg）或生理盐水分别在缺血前30 min及缺血后Zh腹腔注射给药，在灌注24h后，进行神经功能评分，然后取脑的2切片进行2%TTC染色，计算梗死面积及缺血侧和非缺血侧大脑半球面积，根据面积计算缺血体积及两侧半球体积，另做一批同样处理的大鼠，再灌24h后，断头并迅速取脑，进行冰冻切片（厚10协m），作HE染色，光镜下观察，并计数皮层m一IV层单位面积下的神经元密度，作缺血侧与非缺血侧的比较。另取一冰冻切片作白蛋白的免疫组化染色，比较缺血侧和非缺血侧白蛋白染色的灰度。结果显示，ONO一1 078能改善脑缺血引起的神经功能缺失症状、减小脑梗死体积、减少神经元的死亡、减轻脑水肿、减少血浆白蛋白的渗出，其量效曲线在前三项指标呈钟型，而后两项指标为不典型的剂量依赖型。结果提示，白三烯受体拮抗剂ONO一1078具有抗脑缺血急性损伤作用，抗白三烯药物可能成为一类新型的抗缺血急性损伤的治疗途径。 为进一步验证ONO一1 078抗脑缺血的作用，本研究还另用小鼠MCAO局灶性脑缺血模型，在手术前3d及