依据马铃薯S病毒(Potato virus S，PVS)外壳蛋白(CP)基因序列(885bp)设计合成了一对引物，以带毒植物总RNA为模板，通过反转录-聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR)扩增得到长0.88kb的目的片段。将目的片段转入大肠杆菌(E.coli)并进行测序。序列测定结果与其他PVS分离物CP基因序列比较，发现核苷酸同源性可达95％左右，氨基酸序列同源性可达98％左右，证明成功地得到了PVS CP基因。依据PVS CP氨基酸序列对其不同分离物间分子差异进行分析。结果表明，PVS不同分离物间CP氨基酸序列存在明显差异，同源性在90％-100％之间。依据PVS CP氨基酸序列同源性建立了PVS系统进化树并对PVS不同分离物进行了类型分析。 构建了含PVS CP基因的融合蛋白原核表达载体，并在大肠杆菌(E.coli.)中得到表达，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)测定融合蛋白的分子量为58kDa。Western blot印迹结果显示，GST-SCP与PVS抗血清有很强的免疫反应，表明GST-SCP具有天然状态下病毒核衣壳蛋白的抗原性。制备了GST-SCP抗血清，并应用此抗血清建立了PVS间接ELISA检测技术，检测灵敏度为1mg鲜重的病株叶片。 报道了四种PVS的分子检测技术：一步-RT-PCR检测技术(One-step RT-PCR)、免疫捕捉-RT-PCR(imminocapture-RT-PCR，IC-RT-PCR)检测技术、核酸斑点杂交检测技术(Nucleic acid spot hybridization，NASH)和PCR-微量板杂交检测技术。一步RT-PCR检测技术较常规RT-PCR方法更加快速简捷，IC-RT-PCR可在不需提纯病毒RNA的情况下实现对病毒的检测，两者的灵敏度与常规RT-PCR检测方法相同。建立了PVS NASH检测技术并对其进行了较大的改进，证明此方法简便快捷，更适合于大量样品的检测。PCR-微量板杂交检测技术避免了PCR检测方法中电泳检测时溴化已锭(EB)可能造成的污染。 依据马铃薯X病毒(Potato virus X，PVX)CP基因序列(711bp)设计合成了一对引物X1、X2，以带毒植物总RNA为模板，通过RT-PCR扩增得到长0.7kb的目的片段，将目的片段转入大肠杆菌并进行测序。测序结果与其他PVX分离物CP基因序列比较，发现其核苷酸同源性最高可达95％，CP氨基酸序列同源性最高达97％，证明为PVX CP基因。依据PVX CP氨 t。’ 福建农林人学博十论文X 基酸序列对已知 26个 PVX不同分离物进行差异性分析，结果表y］ PVX不 同分离物间＊P氨基酸序列存在差异明显，同源性在86％99％之M。依据P＊X CP氨基酸序列建立PVX系统进化树并对PVX进行了类型分析。 构建了含 PVX CP基因的融合蛋白原核表达载体，并在 E COlt．中得到表 达，SDS－PAGE测定融合蛋白的分于量为 52kDa。Western blot印迹结果显示， GST－XCP与PVX抗血清有很强的免疫反应，表明GST－XCP具有天然状态 下病毒核衣壳蛋白的抗原性。制备了GST－XCP抗血清，并将间接ELISA方 法应用于 PVX的检测，检测灵敏度为 ling鲜重的病株叶片。 利用病毒特异性引物XI、XZ建立了PVX的常规RT－PCR、一步RT－PCR 和 IC．RT－PCR检测技术，证明 RT－PCR检测技术灵敏快速，特异性强。以地 高辛（igoxigenin，DIG）标记的 PVX CP基因为探针建立了 PVX核酸斑点 杂交检测技术和PCR－微量板杂交检测技术，并进行了改进，实践证明此方 法快速灵敏，更适合于大量样品的检测并可避免核酸电泳时EB的污染。 依据P＊YPI基因序列设计合成了一对引物＊P】，＊PZ，以带毒样品植 物总RNA为模板，通过RT－PCR方法扩增得到了0．83kb的目的条带，克隆 并测序结果表明为PVY PI基因。通过对PVY PI蛋白氨基酸序列分析发现 PVY不同分离物间＊蛋白氨基酸序列存在明显差异，氨基酸序列同源性在 64％－94％间。依据门蛋白氨基酸序列建立的PVY系统进化树并对PVY进 行了类型分析。构建了含 PVY PI基因的融合蛋白原核表达载体，并在 E COlt． 中得到表达，SDS－PAGE测定融合蛋白 GST－YP的分子量为 57kDa； 利用引物YP和YPZ，对于带毒样品RNA可通过RT－PCR可扩增得到 0．83kb的目的条带，而健康对照无此目的片段，从而建立了PVY的常规 RT－PCR检测技术。以此为基础，在一个反应中同时加入反转j天和 PCR反应 所需试剂，反应程序中包含反转录和P＊R的所需条件，建立了P＊Y一步 RT－P＊R检测技术。利用吸附于固相酶联板上的PVY特异性抗血消对病奇进 行捕捉纯化及热处理后，直接进行RT－盯R成功地扩增得到0．83讪的口的片 段，而对照无扩增片段，从而建立了P＊YI＊－RT－P＊R检测技术。上述两种 方法与常规方法灵敏度相同，但更为简捷、快速、易于操作：利用地高辛标 记的 PV