山竹壳中原花青素的提取纯化与活性研究

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本研究以山竹壳为实验材料,采用响应面法对山竹壳中原花青素的微波提取条件进行优化,通过大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶柱层析进行提取物的纯化分离,建立了山竹壳原花青素的高效液相色谱分析的分离条件,并对大孔吸附树脂纯化产物的体外抗氧化活性和抑制肿瘤细胞活性进行了探讨。主要实验结果如下:为优化山竹壳原花青素的微波辅助提取工艺,在单因素实验的基础上,采用响应面法建立了该方法的二次多项数学模型,并得到了最优提取条件:乙醇浓度74%,液料比15:1,浸提温度67℃,理论浸出率为27.43%。验证实验表明该条件下实际值为27.26%,与理论值误差为0.62%,说明该二次多项数学模型可靠。静态吸附解吸和动态吸附解吸实验表明,大孔吸附树脂XDA-7对山竹壳原花青素具有良好的吸附和解吸性能。大孔吸附树脂分离纯化山竹壳原花青素的最佳纯化条件是:吸附流速2BV/h,使用6BV用量60%的乙醇作为洗脱剂,解吸流速为2BV/h。在此条件下纯化后的样品经盐酸-香草醛检测浓度为66.20%。经过大孔吸附树脂XDA-7初步分离得到的粗提物再经Sephadex LH-20凝胶柱分离,收集得到4个组分。山竹壳原花青素的HPLC分析条件为:Symmetry C18色谱柱(4.6×150mm,5μm),流动相A为0.4%的乙酸水溶液,流动相B为乙腈,设定洗脱流速为l mL/min,柱温30℃,进样量20μL,梯度程序为:0-5min,A:95%;5-12min,A:95%-88%;12-27min,A:88%-81%;27-40min,A:81%-95%;40-50min,A:95%;检测波长为280nm。在此条件下可对山竹壳原花青素粗提物得到较好的分离效果。经Sephadex LH-20凝胶柱纯化得到的4个组分在此HPLC分析条件下检测,结果表明有两个组分较为单一,对这两个组分继续进行HPLC-MS定性检测,分别为(-)-表儿茶素和B-型原花青素三聚体。山竹壳原花青素粗提物对DPPH、O2-·和·OH均有一定的清除活力,其IC50值分别为7.77mg/L、42.30mg/L和193.58mg/L;山竹壳原花青素粗提物的总抗氧化能力为33.83U/mg,具有较强的抗氧化活性。山竹壳原花青素粗提物显著抑制S-180细胞的增殖,对Bcap-37细胞的增殖也起到了一定的抑制作用。
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